参附强心合剂对心衰大鼠肾素、angⅱ、醛固酮、ne及心肌组织病理变化调控作用的研究

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1、一、实验材料与方法（一）实验材料1.实验动物清洁级SD大鼠72只，一级质量标准，雄性，体重130±20g，由浙江大学医学院动物中心提供。许可证号：SCXK(浙)2003-0001。2.实验药品（1）参附强心合剂制备药物组成：红参3g附子5g葶苈子10g玉竹15g制剂工艺：将各药加水煎煮二次，第一次1.5小时，第二次0.5小时，浓缩成2g/ml的生药煎剂。（2）苯那普利和美托洛尔溶液配置：苯那普利购自北京诺华制药有限公司，产品批号为X1058；美托洛尔购自阿斯利康制药有限公司，产品批号为08060111。用时以蒸馏水配置成4mg/ml的液体。3.实验试剂无水乙醇：杭州市长

2、征化工厂批号:20060309青霉素钠针：华北制药股份有限公司生产批号:20060412肝素钠注射液：华北制药股份有限公司生产批号:061201氯化钠注射液：上海百特医疗用品有限公司批号:S0710024肾素放射免疫分析药盒，北京北方生物技术研究所批号:080120血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)放射免疫分析药盒，北京北方生物技术研究所批号:080120醛固酮(ALD)放射免疫分析药盒，北京北方生物技术研究所批号:080120去甲肾上腺素（NE）ELASA检测试剂盒，美国sigma公司批号:0801153万方数据戊巴比妥钠：国药集团化学试剂有限公司1.实验仪器放射免疫计数器(G

3、c-1200r),科大创新股份有限公司中佳分公司生产电热恒温水浴箱：上海医用恒温设备厂微量加样器：德国Eppendorf公司-30℃低温冰箱：日本SANYO公司高速离心机：上海医用分析仪器厂FA1104电子天平：上海天平仪器厂电热高温烘干箱：美国Heraus公司台式高速冷冻离心机：美国Heraus公司AF100制冰机：荷兰Scotsman公司低温高速离心机：美国Heraeus公司倒置显微镜：Olympus公司BX60型显微镜：日本Olympus公司高压灭菌锅：英国AstellScientific公司石蜡切片机：英国Shandon公司三高CMIAS98B型多功能彩色计算机

4、病理图像分析仪：北京航空航天大学SK-1型快速混匀器：江苏金檀医疗器械厂PHILIPSIE33超声诊断仪：飞利浦电子公司（二）实验方法1．动物造模与分组：（1）模型制备：采用腹主动脉缩窄法制做心衰大鼠模型：取雄性成年SD大鼠72只，随机取12只作为假手术组，余为手术组：用3%戊巴比妥钠(按1ml/kg)麻醉，将动物固定于手术台上，腹部正中切口2cm后钝性分离腹主动脉，在肾动脉分枝上用7号缝合线将腹主动脉与7号针头一起结扎，然后抽出探针形成腹主动脉狭窄(约50%)，同时腹腔一次性注射青霉素10万单位关腹缝合，假手术组仅分离腹主动脉而不行缩窄术。造模时间四周。（2）动物分组

5、与给药：4万方数据将造模成功大鼠45只随机分为五组：参附强心合剂大、中、小剂量组分别以参附强心合剂相应剂量灌胃（分别20倍、10倍、5倍于成人剂量，即：14g/kg.d、7g/kg²d、3.5g/kg.d）；西药对照组予以苯那普利、美托洛尔相应剂量灌胃（分别相当于成人剂量10倍，即苯那普利2mg/kg.d、倍他乐克5mg/kg.d）；模型对照组以蒸馏水灌胃。另假手术组10只，蒸馏水灌胃作为空白对照组。给药时间8周1.标本的采集及保存（1）血标本：末次灌胃1小时后取血分离血清，腹主动脉插管抽取血液10ml，6ml加入EDTA、8一羟基喹呤、二巯基丙醇抗凝剂试管，4ml加入

6、无添加剂试管，冰浴，4℃离心(2000r／min)10min，取上清－20℃冰箱保存。（2）心肌标本：大鼠处死后，迅速打开胸腔，取出心脏洗净，吸干水分。将每组100mg组织标本用液氮研碎后，迅速转移到RNasefree的5ml玻璃匀浆瓶中，加入1mlTrizol,匀浆2分钟，移入RNasefree的1.5mlEP管中,剧烈振荡,4℃放置15分钟后离心(2000r／min)10min，取上清－20℃冰箱保存。2.指标检测：3.1左室重量与体重比（LVW/BW）测定：大鼠处死后，迅速打开胸腔，取出心脏，置于冰Hank氏液中洗净血液，沿房室间沟剪去心房，再沿室间隔剪去右心室，

7、剩下左心室以滤纸吸干水分，称重后计算出LVW/BW。3.2Elisa法检测血液及心肌组织中肾素水平：检测步骤如下：（1）加入100ul标准品、100ul血标本（或心肌标本）上清夜于相应反应板孔中。（2）轻轻混匀30秒，封住板孔，37°C温育90分钟。（3）洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔内加入350ul洗涤液），并去除水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；反复洗涤5次。（4）每孔加入检测溶液A工作液100。轻轻混匀30秒，封住板孔，37°C温育60分钟（5）洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔内加入350ul洗涤液），5万方数据