hbv对ang的体外调控作用及机制研究

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1、HBV对ANG的体外调控作用及机制研究⑧论文作者签名：星亟虽指导教师签名：毡；宣论文评阅人1：黄菌数授抗划垣范太堂评阅人2：丑塞基数援浙江太堂啦属筮二医院j平阅人3：塞渔红副教援浙江太堂瞄属箜二医院评阅人4：评阅人5：答辩委员会主席：奎兰娟院±浙江太堂附属筮二医院委员1：范丞赴教授浙江生医药太堂委员2：盛圭羞数授浙江太堂隘属筻二医院委员3：委员4：委员5：答辩日期：兰皇!竺堡兰旦2生旦浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经

2、发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得浙江太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：J虱fjI芡蒙签字日期：劢一年2月2了日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解逝塑太堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙江太堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：同恢啜导师签

3、名：签字日期：劢／铲≥月却日签字日期：、智月．年．．y¨ⅥJ似∞浙江大学硕士学位论文致谢致谢首先，感谢我的导师陈智老师，他渊博的学识，严谨的治学态度，实事求是的科研态度，是我今后学习和工作的榜样，也将激励着我不断前进。无论是在实验中，还是在学>--j和生活中，均给予了我很多无私的帮助和无微不至的关怀。其次，衷心感谢李兰娟院士为我提供了如此优秀的科研平台。在这里，我学到了前沿的科研知识、先进的实验技术，提高了自身的科研能力和综合素质。再次，衷心感谢李淑萍老师在实验室中给予我的悉心指导以及论文撰写过程中给予我的指导。最后，感谢浙江大学医学院附属第一医

4、院传染病诊治国家重点实验室的朱海红、陈锋、郑敏、羊正纲、李敏伟、刘艳宁、吴炜、刘伟侠等老师，宋广忠、阳乔、徐航娣、施毓、薛继华、杨英、杨帆、楼国华、胡英等师兄师姐师妹；王静、吴珊珊、万天红、陈翔等技术员在我实验过程中的帮助与支持!深深感谢一直给予我关心、鼓励和支持的家人。最后，感谢答辩委员会和参加论文评阅的专家和老师们为本论文给予的宝贵建议与悉心指导!浙江大学硕士学位论文中文摘要HBV对ANG的体外调控作用及机制研究浙江大学医学院硕士研究生导师内科学(传染病)周晓棠陈智教授中文摘要研究目的观察HBV对ANG的调控作用及其机制，并观察抑制ANG对细

5、胞增殖的影响。研究方法利用HepG2．2．15细胞模型及质粒pcDNA3．1．HBx转染的HepG2细胞，通过Real．timePCR检测ANGmRNA及Elisa，WesternBlot检测ANG蛋白变化，观察HBV／HBx对ANG的调控作用。通过WesternBlot及Elisa检测HBV／HBx对IL．6的调控作用，并检测IL．6刺激及抗体封闭IL．6活性后ANG细胞内外蛋白含量的变化。WesternBlot检测HBV／HBx对HIF．1a的调控作用，并WestemBlot检测HIF．1asiRNA沉默HIF．1a基因后，ANG蛋白表达的变

6、化。采用免疫荧光方法检测HBV对ANG核转移的影响。通过ANGsiRNA(50nM)转染HepG2．2．15细胞及使用ANG核转移抑制剂neomycine，MTT检测细胞抑制率，并检测ANG基因沉默后核糖体RNA45SRNA的合成变化。研究结果Real．timePCR及Elisa，WesternBlot结果显示在HBV病毒稳定复制的HepG2．2．15细胞及转染X蛋白的HepG2-HBx细胞中，ANGmRNA及蛋白水平均高于对照组。Real．timePCR结果显示在HepG2-HBx细胞中ANG水平升高45SRNA转录水平升高，ANG基因沉默后其

7、转录水平降低。WesternBlot结果显示，TT浙江大学硕士学位论文中文摘要HepG2．2．15细胞及HepG．HBx细胞中IL．6及HIF．1a蛋白水平均高于对照组。Real．timePCR及Elisa结果显示IL．6刺激后ANGmRNA及蛋白水平均明显升高，抗体封闭IL．6活性后，ANG蛋白表达降低。WestemBlot及Elisa结果显示，HIF．1a基因沉默后，ANG蛋白表达降低。免疫荧光结果显示较于对照，2215细胞中核转移明显被促进。MTT结果显示，HepG2．2．15细胞中ANG基因沉默或加入核转移抑制剂后细胞增殖明显抑制。研究结

8、论HBV／HBx可上调ANG，这种上调作用可能是通过其对IL．6及HIF．1a的上调实现；HBV可促进上调的ANG核转移；ANG活性被抑