创复康喷剂对大鼠创伤感染模型创面中细菌及tgf-α含量影响的研究

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1、创复康喷剂对大鼠创伤感染模型创面中细菌及TGF-α含量影响的研究实验研究1实验目的本实验采用SD大鼠创伤感染模型，以康复新为阳性对照药物，以生理盐水为空白对照药物，旨在通过检测大鼠感染创面中细菌含量及转化生长因子α的含量，来观察创复康喷剂对大鼠皮肤创伤感染模型的治疗效果，并借以探讨该方治疗创伤的作用机理，为创复康喷剂治疗创面感染提供实验依据。2实验材料2.1实验动物合格SD品系大鼠30只，雌雄各半，清洁级，体重220±10g/只，由西安交通大学实验动物中心提供，动物质量合格SCKS(陕)2007—001。2.2动物饲料及饲养条件大鼠标准饲料，其组分为豆粉20%、

2、面粉20%、玉米粉20%、麸皮20%、高粱料20%，由西安交通大学实验动物中心中心提供，采用不绣钢鼠笼，分组单笼饲养，饮用蒸馏水，自然采光，自由进食，室温22℃左右。相对湿度50%。2.3实验用药2.3.1创复康喷剂处方组成制备组成：苦参30克黄柏20克苍术15克艾叶10克蚤休25克花椒12克全部药材购自陕西中医学院附属医院中药房，经鉴定，属2000年版《中华人民共和国药典》规定的药用品种，药材质量合格。创复康喷剂（由陕西中医学院附属医院制剂室提供）采用醇提水沉法制取。将3付中药粉碎后装于圆底烧瓶中，根据提取工艺流程加以6倍量乙醇向瓶中装入70%乙醇，加热萃取回

3、流2次，每次3小时，共提取中药15付，将5次提取的药液密封静置2天，采用抽滤法进行过滤，过滤后的药液分装于广口烧杯中放置在电热鼓风干燥箱中进行挥发，将酒精完全挥发，制备成1g/ml的创复康喷剂，密封，4°冰箱保存，备用。2.3.2创复康喷剂（由陕西中医学院附属医院制剂室提供），100ml浓度：1g/ml2.3.3康复新液：四川好医生攀西药业有限责任公司生产，批号：国药准字Z51021834；规格：100ml/瓶。2.3.4生理盐水：西安双鹤药业有限公司，批号：C050721033陕西中医学院2010届硕士学位论文2.1其他如麻醉药品、辅助药品由陕西中医学院附属医

4、院药剂科提供2.3.1实验试剂TGF-α放射免疫试剂盒北京普尔伟业生物科技有限公司0.1mol/LPBS缓冲液（ph7.2―7.4）陕西中医学院医学院生化实验室提供普通营养琼脂培养基（20090928）北京奥博星生物技术有限公司血琼脂培养基平皿（20090928）北京奥博星生物技术有限公司牛肉浸膏（20080602）北京奥博星生物技术有限公司金黄色葡萄球菌(ATCC25923)陕西中医学院微生物室提供2.3.2实验仪器微波粉碎机：QPJ-1B，天津天利公司显微镜：ZEISSImagerA1低温离心机，放射检验设备由陕西中医学院第二附属医院核素室提供电热鼓风干燥箱

5、：DHG-9075A，上海一恒科技723可见光分光光度计，上海光谱仪器有限公司3实验方法3.1分组30只SD大鼠购回后，适应性喂养一周，然后随机分为A生理盐水空白组，B创复康喷剂实验组、C康复新药物对照组。三组均用下述造模法造模。各组大鼠体重经统计处理，无显著性差异。（P>0.05）结果见表1。表1三组动物模型造模前体重比较（x±s）组别N体重（g）空白组10221.97±8.29对照组10223.91±9.54实验组10222.06±9.39注：按a=0.05P＞0.05，三组动物模型造模前的体重比较无显著性差异。（体重均以g表示）3.2含菌肉汤培养基的制备将

6、经过转接培养的金黄色葡萄球菌用生理盐水稀释，用分光密度仪调整浓度为5麦氏比浊标准的浓度，将标准浓度的菌悬液按照1:5的比例加入到肉汤培养基中，经恒温37℃培养24小时，取出后放置在4℃的冰箱中保存。4创复康喷剂对大鼠创伤感染模型创面中细菌及TGF-α含量影响的研究2.1造模按照付小兵等报道的背部全层皮肤切除感染模型制备方法[11]并加以改进：选用健康SD大鼠，实验前一天脱毛，称重，10%水合氯醛(3.5ml／kg)腹腔麻醉。不消毒，在脊柱两侧用尖刀将动物背部皮肤方形全层切除，面积为2.54cm2共4处。用4层的纱布覆盖在大鼠背部并与皮肤缝合，取出冰箱中含菌肉汤培

7、养基，常温下解冻，用注射器抽取1ml菌液，再次用生理盐水按1：5比例稀释，分别在背部的创面上滴金葡菌液1ml。外套自制钢丝网罩，以防大鼠撕咬纱布。于24小时后在此滴加含菌培养基，剂量同前。48小时后后打开伤口，创口表面附有黄白色脓性分泌物，伤口略红肿，周围皮温略升高，采尾部血化验血常规白细胞明显较对照组增高，创面感染模型造模成功。2.2给药方法于48小时后开始用喷洒药物，实验组外喷创复康喷剂，药物对照组外用康复新液，空白组用生理盐水对照。采用外喷，5ml/次，每日2次，早9点，晚8点各一次。2.3标本采集及处理2.3.1创面组织细菌定量测定[12-13]在造模成

8、功后当天0d及给药4d、