糖痹胶囊对糖尿病大鼠坐骨神经超微结构的影响

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1、糖痹胶囊对糖尿病大鼠坐骨神经超微结构的影响糖尿病周围神经病变(diabeticperipheralneuropathy，DPN)是糖尿病最多见的并发症之一。据统计，60%~90%以上的患者有不同程度的周围神经损害，与病程相关不明显[1]。很大一部分病人在糖尿病早期即可发生[2]。由于一旦出现DPN临床症状时多属晚期病变，故及时发现并有效地治疗DPN是一个急待解决的重要课题。西药对DPN治疗主要从阻止其发病机理方面进行，但均因作用不理想或副作用太大而不予肯定。近年VitB12的代谢物——甲基B12(又名甲钴胺，商品名“弥可保”)的临床应用取得

2、了一定疗效。其治疗机制还不十分清楚，由于甲基B12是机体正常的代谢物，故不良反应较少，是目前治疗DPN的常用西药之一，但其作用也有一定的局限性。糖痹胶囊是我院在多年治疗糖尿病和DPN的临床实践基础上[3]，借鉴全国名老中医路志正治疗DPN的经验，针对DPN的中医病因病机及临床表现研制的复方制剂[4]。该方在临床治疗糖尿病取得了较好的疗效[5]。本研究观察了糖痹胶囊对糖尿病大鼠坐骨神经超微结构的影响，现报道如下。　　1　材料与方法教师论文发表　　11　动物　健康雄性SPF级SD大鼠30只，平均体质量(200±20)g，由广东省卫生厅

3、实验动物中心提供，合格证号：0022505。在广州中医药大学SPF级实验室正常饲料喂养。　　12　药品　糖痹胶囊主要药物组成：黄芪、桂枝、当归、白芍、丹参、怀牛膝、路路通、水蛭、地锦草等，由广东省中医院提供，每粒胶囊含生药05g，批号：粤药制字Z03020962;弥可保(甲钴胺片)由日本卫材株式会社生产，生产批号：国药准字H20030812，分装批号：060421A。　　13　试剂及仪器　链脲佐菌素(streptozotocin)为美国Sigma公司产品;JEM1200EX型透射电镜为日本电子株式会社产品;LEICAUCI型超薄切片机为莱卡

4、公司产品。　　14　动物模型制备[6]　取健康雄性SD大鼠30只，禁食12h后，将链脲佐菌素用01mmol/L柠檬酸缓冲液(pH45)配成浓度为20mg/L，按50mg/kg一次性腹腔注射，72h后尾静脉取血，用血糖仪测定血糖(取血前禁食8h)，凡血糖>138mmol/L，且尿糖阳性者即进入实验(造模过程中死亡5只，25只造模成功进入试验)。　　15　分组及给药　将造模成功的糖尿病模型大鼠25只随机分5组，模型稳定后7d开始进行治疗，疗程共4周，实验期间不用任何药物控制血糖(1例因灌药不当导致大鼠死亡而剔除，共24

5、只完成实验)：中药低剂量组灌服糖痹胶囊(剂量为05g·kg-1·d-1)，按动物系数折算，相当于60kg成人的10倍;中药高剂量组灌服糖痹胶囊(剂量为1g·kg-1·d-1)，按动物系数折算，相当于60kg成人的20倍;西药组灌服弥可保(剂量为250μg·kg-1·d-1)，按动物系数折算，相当于60kg成人的10倍;中西药组灌服糖痹胶囊和弥可保(剂量分别为05g·kg-1·d-1和250μg·kg-1·d-1);模型组给予等容积生理盐水每天灌胃1次;正常对照组给予

6、相同饲料喂养，不予任何药物。　　16　电镜观察　于治疗后4周末一次性腹腔注射10mg/L水合氯醛(300mg/kg)麻醉，俯卧位固定，取大鼠坐骨神经(坐骨切迹至远端1cm)，置于预冷的体积分数25%戊二醛中固定，10g/L四氧化锇进行后固定，Epon812环氧树脂埋剂与体积分数100%丙酮1∶100浸泡，修块定位后切片机切片，醋酸铀和硝酸铅双重染色，于透射电子显微镜下观察糖尿病大鼠坐骨神经超微结构。　　2　结果教师论文发表　　结果见图1。正常组大鼠坐骨神经有髓神经纤维的髓鞘致密，均匀、结构完整、排列规则且层次分明，髓鞘板层呈同心圆状排

7、列;轴索完整且可见神经微丝、微管及线粒体;在由神经细胞支持和包绕的轴索内，线粒体嵴密集，神经丝丰富，神经膜结构正常，Schwann细胞及无髓神经纤维均正常，神经内微血管壁无增生(图1-a1、a2)。模型组大鼠坐骨神经有髓神经纤维的髓鞘板层完全分离，其间有水肿液和崩解的碎片，有的髓鞘出现斑块状脱髓鞘和节段性脱髓鞘;轴索萎缩，线粒体嵴消失，管泡　　状成分增加，Schwann细胞变性坏死呈细胞碎片，无髓神经纤维和神经膜线粒体嵴减少，毛细血管扩张充血，炎细胞浸润(图1-b1、b2)。弥可保组大鼠坐骨神经髓鞘出现斑状变化，神经膜细胞和轴索内的线粒体大部分正常

8、，部分神经膜线粒体嵴减少，线粒体膜不完整(图1-c1、c2)。