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《mir-200c对大鼠肝星状细胞间质-上皮逆转分化的调控作用》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、miR-200c对大鼠肝星状细胞间质-上皮逆转分化的调控作用邵军宋晓静陈川宁刘友平李洪段春燕[摘要]目的:探讨miR-200c对大鼠肝星状细胞间质-上皮逆转分化的调控作用,以寻找调控大鼠肝星状细胞MET的作用靶点。方法:培养大鼠肝星状细胞株并乙酸激活,将激活细胞随机分为miR-200cmimics组、miR-200cNC组和空白对照组。对miR-200c处理后细胞采用ELISA法、RT-PCR及Western-blot等技术分析大鼠肝星状细胞间质-上皮逆转分化的调控作用。结果:EUSA结果显示,miR-200cmimics组比较NC组和空白对照组Col
2、-I及FN的含量明显下调。Western-blot显示,NC组和空白对照组比较,miR-200cmimics组E-cadherin蛋白表达量增高,而vimentin、P-Smad3、ZEB1和ZEB2的蛋白表达量降低,其P<0.05,差异具有统计学意义。RT-PCR结果显示,转染后miR-200cmimics组ZEB1mRNA的相对表达量低于NC组和空白对照组,且差异具有统计学意义(p<0.05),而ZEB2和Smad3mRNA的相对表达量,各组差异具无统计学意义(p>0.05)o结论:ZEB作为肝星状细胞的发生EMT过程中的作用靶点
3、,miR-200c通过直接抑制ZEB基因转录或者翻译而发挥对肝星状细胞间质-上皮逆转分化的调控作用。[关键词]miR-200cZEB上皮一间质转化间质-上皮转化肝纤维化D0l:10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2015.28.46木文系四川省科技厅应用基础研究计划(14JC0038),四川省教育厅科研项目(12ZB242)。作者单位:646000,四川泸州,泸州医学院生物化学与分子生物学教研室TheRegulationFunctionofMiR-200cforMesenchymal-epithelialTransitiononH
4、epaticStellateCellsofRatsShaoJun,SongXiaojing,ChenChuanping,LiHong,DuanChunyanAbstract:ObjectiveTostudytheregulationfunctionofmiR-200cformesenchymal-epithelialtransitiononhepaticstellatecellsofratsandlookforregulatingtherathepaticstellatecellsMETcontroltargets.MethodsThehepatics
5、tellatecelllineswerecultivatedandactivatedbyacetaldehyde,andrandomlydividedintomiR-200cmimics,miR-200cNCandblankcontrolgroup.TheregulationfunctionofELISA,RT-PCRandWestern-blotonthemiR-200chepaticstellatecells’METofratswasanalyzedafter.ResultsELISAresultshowsthatcomparedwit
6、htheblankcontrolgroupandmiR-200cNCgroup,theconcentrationofCol-IandFNweredecreasedobviouslyinmiR-200cmimicsgroup(P<0.05).Western-blotresultshowsthattherelativeexpressionofE-cadherininmiR-200cmimicsgroupwashigherthantheothertwogroups,whiletherelativeexpressionamountofvimentin,S
7、mad3,ZEB1andZEB2proteinwaslowerthantheothertwogroups.TheZEB1mRNArelativeexpressionlevelinmiR-200cgroupmimicsgroupwasrelativelylow.AndthereisnosignificantdifferenceofmRNASmad3andZEB2levelinthreegroups(P>0.05).Conclusion:Asthetargetpointofhepaticstellatecells’EMT,ZEBcanbe
8、directlycontrolledandreversedbyMicroRNA-200cmim