模拟失重大鼠下丘脑不同部位的fos和gfap表达

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1、模拟失重大鼠下丘脑不同部位的Fos和GFAP表达　　摘要:目的了解长期模拟失重状态下大鼠下丘脑功能活动状态.方法用Fos和胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的ABC法，分别检测4周模拟失重大鼠下丘脑神经元和星形胶质细胞（AS）的变化.结果二者表达仅见于室旁核尤其大细胞部、视上核和视交叉上核，而其它部位未见表达;AS胞体变大、突起增粗增长.结论下丘脑这些核团参与了对长期失重的反应，且可能与加压素分泌增加有关.　　Keyus;gene，Fos;glialfibrillaryacidicprotein;ulation　　Abstract

2、:AIMToresearchthefunctionsofrathypothala-musunderlong-termsimulatedmunohis-tochemicalABCmethods，usneuronsandastrocytesin4ulatedrats.RE┐SULTSExpressionsofFos-andGFAP-positivecellsus，es-peciallyinmangocellularpart，supraopticnucleiandsuprachiasmaticnuclei，icprocesses.C

3、ONCLUSIONThesenucleiinhypothalamusmayparticipateinthereactiontolong-termgkg-1，ip）深麻下开胸，经升主动脉插管，先以100mL生理盐水冲洗血液，继以含40gL-1多聚甲醛的0.1molL-1磷酸缓冲液（pH7.4）500mL，灌流1.5h以上，注毕立即取脑置于200gL-1蔗糖溶液中过夜（4℃），至组织块沉底.下丘脑部位作冰冻连续冠状切片，片厚30μm，置于10mmolL-1的PBS中.　　1.1.3免疫组化反应（ABC法）切片先入含3gL-1Tri

4、tonX-100的PBS浸泡30min（室温）.切片分为二组:第一组:抗Fos蛋白免疫组化反应（ABC法）:抗Fos蛋白免疫组化反应:①入兔抗Fos抗体稀释液（11000，SantaCruz），孵育48h（4℃）;②生物素标记的羊抗兔IgG（1500，Sigma），放置2h（室温）;③生物素-卵白素-HRP复合物（ABC，1500，Sigma），放置2h（室温），最后用葡萄糖氧化酶-DAB-硫酸镍铵法呈色.以上每一步骤之后均用PBS液充分漂洗3次，每次10min（下同）.第二组:抗GFAP免疫组化反应:①入兔抗GFAP抗体稀释

5、液（13000，Sigma），孵育48h（4℃）;②生物素标记的羊抗兔IgG（1500），孵育2h（室温）;③生物素-卵白素-HRP复合物（ABC，1500），孵育2h（室温），最后用葡萄糖氧化酶-DAB-硫酸镍铵法呈色.　　切片漂洗后裱片、晾干、脱水、透明和封固，光镜下观察并摄像.　　1.2对照组　　1.2.1空白对照组（n=2）将上述环境下饲养的同步对照大鼠按上述方法麻醉灌注取材切片，作抗Fos和抗GFAP免疫组化反应，以观察动物在基础状态下中枢神经系统内Fos和GFAP表达情况.　　1.2.2免疫组化染色替代实验取实验组

6、大鼠部分延髓切片，用10mmolL-1PBS分别取代抗Fos和抗GFAP抗体，再按ABC法进行免疫组化染色，结果为阴性.　　2结果　　2.1对照组　　2.1.1Fos阳性神经元其胞核为黑色，胞质为阴性，在PVN，SON和SCh有少量分布（Fig1-A’，B’）.　　2.1.2GFAP阳性细胞上述核团GFAP阳性细胞表达较少（Fig2-A’，B’）.这些细胞的形态特点是胞体小，突起细而短.　　2.2实验组　　2.2.1Fos阳性神经元集中在PVN的大小细胞部（Fig1-A），尤其以腹侧大细胞部更明显（Fig1-A1），SON（F

7、ig1-B）和视交叉上核（SCh）均有大量表达.　　2.2.2GFAP阳性细胞主要特点是:①与对照组比较，GFAP阳性细胞胞体变大，突起变粗变长，形成一种肥大型的AS;②在上述Fos表达阳性部位的GFAP表达数量均见明显增加（Fig2-A，B），表现出二者部位和范围的一致性.　　3讨论　　3.1模拟失重的动物模型尾部悬吊模型是由NASA提出的，近十年被广泛应用，较其他方法显示出其优越性，它既能模拟失重时的低运动负荷，又能模拟血液动力学的低动力状态，陈杰等［7］对该方法进行了改进，研究结果表明该种方法可悬吊120d，期间对大鼠的

8、应激影响轻微，且出现血液向头部流动、血容量减少、后肢肌肉萎缩、骨机械性能变差等和其他一些生理性改变，类似于航天员失重引起的一些典型变化.　　3.2Fos蛋白和GFAP表达的意义　　3.2.1机体在失重状态下出现多种生理性变化除了各部承受载荷削减外，还出现体液及血液头向转移和重