浅谈人源抗狂犬病毒特免血浆筛查方法的建立

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1、浅谈人源抗狂犬病毒特免血浆筛查方法的建立【目的用ELISA法对人源抗狂犬病毒抗体血浆进行筛查。方法采用国内几家狂犬病毒IgG抗体诊断试剂盒（ELISA法），结合小鼠中和试验测定法，对经0、3、7、14、28日程序免疫的供浆员之血样进行抗狂犬病毒抗体效价检测。结果和小鼠脑内中和法比较，使用不同厂家ELISA试剂盒，检测结果存在一定差异，其中C、D厂家试剂盒检测结果比较接近，线性关系较好（分别为：r＝0.997；r＝0.996），可以替换小鼠脑内中和法作为采浆站血浆初筛的方法。结论经过反复筛选和比较，为大规模筛查抗狂犬病毒特免血浆提供了技术条件。　　【抗狂犬病毒抗体；狂犬病疫苗；ELISA；

2、检测；中和试验　　Establishmentofmethodtoscreeninghumananti-rabiesviruspositiveplasma　　【AbstractObjectiveThepositivehumanplasmacontainingantibodyagainstrabiesvirusethod)obtainingfromseveralmanufacturesinourcountryabiningiceneutralizationtest.Thelevelofantibodyagainstrabiesvirusinedinbloodsamplesofdonorsth

3、atmunizedanufactureCandDissimilar,theirlinearcorrelationisbetter(rc=0.997,ra=0.996respectively).ConclusionThemiceneutralizationtestcanbereplacedbyELISAkitmethods.　　【Keywordsantibodyagainstrabiesvirus；rabiesvaccine；ELISA；neutralizationtest；screening　　狂犬病是一种严重危害人类生命的人畜共患疾病，主要通过带狂犬病毒的动物传播给人类，发病后致死率为

4、100％。据卫生部2005年10月公布的数字表明，病死率仍居我国法定传染病的第2位，据调查，近年来狂犬病发病呈上升趋向，目前尚无治疗狂犬病的有效药物。固然狂犬病抗血清对预防狂犬病起着重要功能，但其因系异源性蛋白而副反应较大，使用中易发生***反应和血清病，其发生率为15％～45％［1］，而且对某些疫苗的抗体反应有抑制功能［2］，使用人源狂犬病免疫球蛋白（HRIG）则克服了上述缺点，和异源抗体相比，具有在血液中维持时间较长、保护效果好的优点，这使得HRIG的需求量越来越大［3］，为此，我们于2003年末开始进行人源抗狂犬病抗体血浆的筛查工作，目的是早日开发出平安有效的HRIG制品。但由于方

5、法学的限制，《中华人民共和国药典2005年版三部（附录ⅪJ）》规定的小鼠效力中和试验（NIH）［4］方法难于做大规模的检测。为寻找适合的方法，笔者曾建立了间接ELISA法测定狂犬病毒抗体的方法，并进一步证实了该方法和小鼠中和法有良好的相关性，但现有ELISA法在实际应用中有灵敏度不高、且存在漏检的新题目。为解决上述新题目，笔者结合小鼠中和法对国内4个ELISA厂家的狂犬病毒抗体ELISA诊断试剂盒进行筛选和比较，获得了较满足的结果。　　1材料和方法　　1.1材料　　1.1.1狂犬病毒抗原　　狂犬病毒北京固定毒AG株适应地鼠肾细胞传代培养的病毒悬液经灭活初步纯化后的疫苗原液，由兰州生物制品

6、探究所疫苗四室提供。　　1.1.2ELISA检测试剂　　ELISA定量检测人抗狂犬病抗体诊断试剂（批号分别为：20040703、20050301、20050302、20050801）分别由兰州生物制品探究所、宁波天润生物药业有限公司、武汉生物制品探究所、珠海海泰生物制药有限公司提供），抗狂犬病参考血清由中国药品生物制品检定所惠赠。　　1.1.3人用狂犬病疫苗和工作对照品　　人用浓缩狂犬病疫苗（≥2.5IU/瓶），批号20040401、20040403、20041101。工作对照品（HRIG）批号9008。以上制品均由兰州生物制品探究所生产。　　1.1.4实验样本　　狂犬病毒抗体阳性血浆2

7、0份（SNT效价≥10IU/ml），阴性血浆100份，均由兰州生物制品探究所血液制剂室提供。　　1.2方法　　首先对供浆者进行0、3、7、14、28日程序狂犬疫苗注射，于最后一针1个月后采集血样，用ELISA试剂盒检测其相对效价，将此血样和标准品进行系列稀释，分别和狂犬病毒悬液结合，小鼠脑内注射，在规定的时间内，观察小鼠存活和死亡情况，测定出供试品效价，之后再用小鼠中和法试验SNT效价进行比较。将中和法测得SNT效价结果≥10IU/