核酸血液筛查(上海浩源)

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1、核酸血液筛查12June2021P1分子生物学概论一核酸血液筛查相关技术二三目录P2核酸血液筛查系统12June2021四血站核酸检测样本的采集、运送和保存三PCR实验室的污染防治分子生物学概论P312June2021核酸的分子组成-核苷酸分子生物学概论P412June2021DNA的一级结构CytosineAdenineThymineGuanineHydrogenBondsDeoxyribose(Sugarmolecule)PhosphoricAcid(Phosphatemolecule)由A/T

2、/G/C四种单核苷酸组成分子生物学概论DNA的二级结构P512June2021DNA分子由相互平行、走向相反、碱基互补的两条脱氧核糖核苷酸链围绕同一中心轴，盘绕成双螺旋结构，螺旋的一侧为大沟，另一侧为小沟。平行链对应碱基总是A==T、G===C配对（basepairing)或互补，形成稳定联系。DNA双螺旋结构P612June2021分子生物学概论核酸的理化性质DNA的热变性与复性DNA热变性后缓慢冷却处理过程称退火annealingDNA加热变性后，若经骤然降温，互补链碱基之间来不及配对互补，形成

3、氢键联系，两链维持分离状态。慢骤分子生物学概论P712June2021核酸分子杂交hybridization当不同来源的核酸变性后一起复性时，只要这些核酸分子中含有相同序列的片段，即可形成碱基配对，出现复性现象，形成杂种核酸分子，或称杂化双链，称核酸分子杂交。分子生物学概论P812June2021DNA半保留复制DNA合成进行时，以两条亲代DNA链中的每—条链为模板，在DNA指导下的DNA聚合酶催化下，按A与T、G与C碱基配对原则合成子代DNA的过程称DNA的复制(replication)。由于复制

4、合成的子代DNA两条脱氧核糖核苷酸链中有一条来自亲代DNA，另一条是以前者为模板新合成的子代DNA链，所以DNA的这种合成作用又称半保留复制(semiconservativereplication)。核酸血液筛查相关技术P912June2021核酸血液筛查相关技术磁珠法提取核酸荧光PCR技术与TMA技术UNG-dUTP防污染系统内对照分子核酸血液筛查相关技术P1012June2021磁珠法提取核酸样品核酸提取磁珠法核酸血液筛查相关技术P1112June2021磁珠法提取核酸第一步：细胞的裂解：破碎细

5、胞，并向溶液中加入磁珠。第二步：结合核酸：pH较低，在高盐环境下，硅胶磁珠带正电荷，选择性的与优化试剂中的核酸结合核酸血液筛查相关技术P1212June2021磁珠法提取核酸第三步：洗涤：用洗涤液将非核酸成分冲洗分离（为清洗干净该步骤可以重复多次）。第四步：核酸的洗脱：pH升高，在低盐环境下，核酸被洗脱下来。核酸血液筛查相关技术P1312June2021PCR技术5’5’3’3’d.NTPs耐热DNA聚合酶引物5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5

6、’3’5’3’5’3’加入试管中核酸血液筛查相关技术P1412June2021PCR技术循环循环延伸5’3’5’3’5’3’5’3’继续延伸5’3’5’3’5’5’TaqTaq3’5’3’TaqTaq5’5’循环核酸血液筛查相关技术P1512June2021PCR技术5’3’5’3’5’3’5’3’5’5’3’3’5’3’5’3’第二个循环4个拷贝第三个循环8个拷贝5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’3’5’5’3’5’3’5’3’5’3’第n个循

7、环2n个拷贝核酸血液筛查相关技术P1612June2021PCR技术分子生物学概论P1712June2021TMA技术核酸血液筛查相关技术P1812June2021TMA与PCR比较TMAPCR扩增原理模拟自然DNA转录成mRNA的过程模拟自然DNA复制的过程靶目标RNADNA酶MMLV逆转录酶及T7RNA聚合酶DNA聚合酶反应体系两种酶，两条引物，dNTP,NTP一种酶，一对引物，dNTP温度条件恒温（41.5℃）循环导热（变性，退火，延伸）扩增仪器水浴箱或者加热块热循环仪扩增产物RNADNA扩增

8、速度每个循环可以生成100-1000个复制物，在15-30分钟内可增加10亿倍复制物以2n扩增，2～3h就能将待扩目的基因扩增放大10亿倍核酸血液筛查相关技术P1912June2021荧光PCR技术SYBRGREENMolecularbeacon核酸血液筛查相关技术P2012June2021TaqMan荧光PCR技术核酸血液筛查相关技术P2112June2021TaqMan荧光PCR技术5’5’3’3’d.NTPsThermalStableDNAPolymeraseP