核酸扩增技术在血液筛查中的应用研究

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1、核酸扩增技术在血液筛查中的应用研宄彭靖常德市中心血站湖南常德415000摘要：目的探宄釆用核酸扩增技术进行血液筛查的应用价值。方法选取2013年6月一2014年4月在我献血站进行无偿献血者的血液标木32202例，且按筛选方法分为实验组和对照组。实验组采用双试剂酶联免疫吸附试验（ELISA）对血液进行筛查，对照组采用核酸扩增技术（NAT）对血液进行筛查。将两组标木的筛查结果进行统计学比较。结果实验组32202例中检出HBVDNA阳性286例，其阳性检出率为1.77%，对照组32202例中检出HBVDNA阳性346例，其阳性检出率为2.15%。结论NAT对HBVDNA的阳性检出率

2、明显高于EUSA,不仅避免了血液筛查中漏检情况的出现，很大程度上降低了输血传播疾病的风险，而且保证了临床上的输血安全，值得在临床上推广应用。关键词：核酸扩增技术；血液筛查；窗U期；输血安全随着社会经济的快速发展，因输血引起的相关传染病的预防和控制已经引起了全社会的高度关注，而预防和控制输血相关传染病的源头就是要对献血者的血液标木进行严格的筛查。双试剂酶联免疫吸附试验，临床上简称ELISA,是在免疫酶技术基础上发展而来的一种免疫测定技术，其过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上为被，加待测抗体（抗原），再加相应酶标记抗体（抗原），生成抗原（抗体）--待测抗体（抗原）--酶标记抗体

3、（抗原）的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物，最终借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。待测抗体（抗原）的定量与有色产物的生成量成正比［1］。核酸扩增技术，临床上简称NAT,包括聚合酶链反应技术、荧光定量PCR技术和其他核酸扩增技术（核酸序列依赖性扩增、连接酶链反应和分枝DNA信号放大系统），其中最主要且最常用的是聚合酶链反应技术，其基木原理类似于DNA的体内复制，首先将待扩增的DNA模板加热至变性解链，随之将反应混合物冷却至一定的温度，且这一温度可将引物与它的靶序列发生退火，之后再将温度升高使退火引物在DNA聚合酶的作用下延伸，这个过程就是PCR的一个循环，也就是

4、说这种循环在适合的条件下是不断重复的［2】。1资料与方法1.1研究对象：选取2013年6月一2014年4月在我献血站进行无偿献血者的血液标本32202例，其中男性19568例，女性12634例，献血者的年龄在19〜47岁，平均年龄为27.7岁；献血者的体重在55〜78kg，平均体重为62.3kg。两组献血者在性别、年龄和体重等方面均无统计学差异（P>；0.05）,冇可比性。1.2研究方法：实验组采用双试剂酶联免疫吸附试验（EUSA）对血液进行筛查，对照组采用核酸扩增技术（NAT）对血液进行筛查。将两组标本的筛查结果进行统计学比较。1.3试剂［3］:实验组：乙型肝炎病毒表面

5、抗原ELISA诊断试剂盒，丙型肝炎病毒抗体ELISA诊断试剂盒，人类免疫缺陷病毒抗体EUSA诊断试剂盒，梅毒螺旋体抗体ELISA诊断试剂盒，乙肝肝炎“两对半”检测试剂盒。对照组：HBV/HCV/HIV荧光PCR核酸检测试剂盒。两组所用的试剂均在有效限期内。1.4仪器［4］:实验组：Xantus全自动加样仪，FAME24/20全自动酶免分析仪，UranusAE200全自动酶免分析仪。对照组：Hamiltonstar全自动核酸提取仪、罗氏cobas?s201核酸血液筛查系统。1.4检测方法：实验组：采用相座的试剂对该组血液标本进行抗-HIV、抗-HCV、HBsAg和梅毒螺旋体抗体

6、的EUSA监测。对照组:将该组血液标本以6例为一组汇集并采用相应的试剂进行HBVDNA、HCVRNA和HIV-1RNA的核酸扩增检测，自动判读结果。当汇集池中某一项的检测结果为阴性吋，说明该汇集池中6份标本的该项NAT检测均为阴性；当汇集池中标本的某一项检测结果为阳性吋，则须将相对应的6份标本拆分并进行该项单标本检测，若检测结果为阴性就说明此标本该项的NAT检测结果为阴性，若检测结果为阳性就说明此标本该项的NAT检测结果为阳性[5]。1.5统计学方法：应用SPSS17.0统计分析软件对资料进行统计分析，计数资料以率表示，计量资料以均数±标准差表示。均数间比较成用

7、t检验，两个变量间的关系比较作相关数据分析，P<0.05,差异显著，具有统计学意义。2结果2.1两组血液标本的HBVDNA的阳性检出率对比结果：实验组32202例中检出HBVDNA阳性286例，其阳性检出率为0.89%，对照组32202例中检出HBVDNA阳性346例，其阳性检出率为1.07%。见表1。表1:两组血液标本的HBVDNA阳性检出率的对比组别例数HBVDNA阳性检出例数HBVDNA阳性检出率实验组322022860.89%对照组322023461.07%P值P<0.05注：通过对