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1、血管内皮细胞生长因子和血管发生素柳明洙，张学武，高圭永，金善姬，张琚【关键词】斑马鱼；,,血管发生素 摘要：目的探讨血管内皮细胞生长因子和血管发生素1及其受体在斑马鱼早期胚胎发育过程中的表达，为构建药物筛选的在体模型提供依据。方法采用多聚酶链式反应，扩增了长约280bp的斑马鱼血管发生素1cDNA部分序列，作为探针，以原位杂交法测定了血管内皮细胞生长因子和血管发生素1及其相应受体flk1和Tie2的表达。结果从受精卵胚胎发育第12小时可见血管内皮细胞生长因子和血管发生素1及其相应受体flk1和Tie2的表达；在受精卵胚胎发育的第16小时，血管内皮细胞生长因子和血管发生
2、素1主要在头部和尾部胚芽表达；第24小时在眼球、视窝、中脑、后脑的腹前侧和肌节中表达，Tie2和Flk1主要在肌间背部动脉血管、躯干新生血管芽和轴向静脉中表达。结论血管内皮细胞生长因子和血管发生素-1及其受体在斑马鱼胚胎发育早期的血管发生过程中可能相互作用，并协调血管发生过程。斑马鱼是研究胚胎发育早期微血管发生和血管发生的极佳动物模型，可用于促血管发生或抑制血管发生药物筛选。 关键词：斑马鱼；血管发生素1；血管内皮生长因子；受体 ExpressionsofAngiopoietin1andItsReceptorsDuringEarlyDevelopmentinZebr
3、afish Abstract：ObjectiveToinvestigatetheexpressionofvascularendothelialgrobryodevelopmentofzebrafish.MethodsUsinghomology-basedpolymerasechainreaction,a280bpofpartialcDNAofzebrafish(zfAng1)inedduringupto24hembryonicdevelopmentbyountinsituhybridization.ResultsThereainlyinheadandtailbud.A
4、t24h,Ang1ainlyinthelens,opticcup,mesencephalon,ventralpartofhindbrain,andmyotomesinthesomites,ainlyexpressedinintersomiticvesselsincludingdorsalaortaandaxialveins,andsproutingvesselsfromthedorsalaortainthetrunk.VEGFainlyinthelens,opticcup,mesencephalonandmyotomesinthesomites,ainlyexpress
5、edinintersomiticvesselsincludingdorsalaortaandaxialveins,andsproutingvesselsfromthedorsalaortainthetrunk.ConclusionAng1,VEGF,Tie2andFlk1,mayactcooperativelyandinteractivelyforvasculardevelopmentinzebrafishduringearlydevelopment.Presentresultsalsosuggestedthatzebrafishasaqualitymodelforst
6、udyonvasculogenesisandangiogenesisduringembryonicdevelopmentandscreeningforangiogenicenhancerorinhibitors. Keya公司。 1.2斑马鱼Ang1(zebrafishAng1，zfAng1)cDNA部分序列的分离从受精卵发育24h的胚胎lZAPcDNA文库(Stratagene,USA)中以PCR和特定引物扩增出一段斑马鱼zfAng1cDNA部分序列，引物根据包括人、小鼠和牛在内的Ang1蛋白的羧基端结构域纤维蛋白样结构域(fibrinogenlikedomain
7、)的氨基酸序列设计。所用的引物：5'TACAA(A/G)AA(A/G)GG(A/G)TT(C/T)GG(A/G)AATCC(AGCT)3'，与人的Ang1蛋白的第344到第352位氨基酸序列YKKGFGNP相对应;5'(TG)CA(C/T)GC(A/G)TC(A/G)AACCACCA(C/T)CC(A/G)CC3'，与人的Ang1蛋白的第445到第452位氨基酸序列GGicrotome(Zeiss)低温切片机制成1mm厚切片。 2结果 2.1zfAng1的cDNA和氨基酸序列用同源PCR法扩增得到了约280bp的zfAng1cDNA片
