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1、血管内皮细胞生长因子和血管发生素论文柳明洙，张学武，高圭永，金善姬，张琚【关键词】斑马鱼；,,血管发生素摘要：目的探讨血管内皮细胞生长因子和血管发生素1及其受体在斑马鱼早期胚胎发育过程中的表达，为构建药物筛选的在体模型提供依据。方法采用多聚酶链式反应，扩增了长约280bp的斑马鱼血管发生素1cDNA部分序列，作为探针.freelentinZebrafishAbstract：ObjectiveToinvestigatetheexpressionofvascularendothelialgrobryodevelopmentofzebr
2、afish.MethodsUsinghomology-basedpolymerasechainreaction,a280bpofpartialcDNAofzebrafish(zfAng1)inedduringupto24hembryonicdevelopmentbyountinsituhybridization.ResultsThereainlyinheadandtailbud.At24h,Ang1ainlyinthelens,opticcup,mesencephalon,ventralpartofhindbrain,.freel
3、yotomesinthesomites,ainlyexpressedinintersomiticvesselsincludingdorsalaortaandaxialveins,andsproutingvesselsfromthedorsalaortainthetrunk.VEGFainlyinthelens,opticcup,mesencephalonandmyotomesinthesomites,ainlyexpressedinintersomiticvesselsincludingdorsalaortaandaxialvei
4、ns,andsproutingvesselsfromthedorsalaortainthetrunk.ConclusionAng1,VEGF,Tie2andFlk1,mayactcooperativelyandinteractivelyforvasculardevelopmentinzebrafishduringearlydevelopment.Presentresultsalsosuggestedthatzebrafishasaqualitymodelforstudyonvasculogenesisandangiogenesis
5、duringembryonicdevelopmentandscreeningforangiogenicenhancerorinhibitors.Keya公司。1.2斑马鱼Ang1(zebrafishAng1，zfAng1)cDNA部分序列的分离从受精卵发育24h的胚胎lZAPcDNA文库(Stratagene,USA)中以PCR和特定引物扩增出一段斑马鱼zfAng1cDNA部分序列，引物根据包括人、小鼠和牛在内的Ang1蛋白的羧基端结构域纤维蛋白样结构域(fibrinogenlikedomain)的氨基酸序列设计。所用的引物：5'
6、TACAA(A/G)AA(A/G)GG(A/G)TT(C/T)GG(A/G)AATCC(AGCT)3'，与人的Ang1蛋白的第344到第352位氨基酸序列YKKGFGNP相对应;5'(TG)CA(C/T)GC(A/G)TC(A/G)AACCACCA(C/T)CC(A/G)CC3'，与人的Ang1蛋白的第445到第452位氨基酸序列GGicrotome(Zeiss)低温切片机制成1mm厚切片。2结果2.1zfAng1的cDNA和氨基酸序列用同源PCR法扩增得到了约280bp的zfAng1cDNA片断，以此片断的DNA可编码得到含有9
7、0个氨基酸残基的zfAng1，将所得到的zfAng1cDNA片断和人、小鼠及牛的血管生成素基因中编码纤维蛋白原结构域的核酸序列进行的多重比较具有54%~57%的同源性，由所获得的zfAng1cDNA片断预测可能编码得到的氨基酸序列和人、小鼠及牛的血管生成素氨基酸序列比较，分别具有41%~45%的同源性。结果见图1。（相同的序列用阴影表示）2.2斑马鱼的Ang1,Tie2,VEGF和Flk1的表达模式应用ount原位杂交法对zfAng1和zfTie2在斑马鱼受精卵胚胎发育至24h的表达进行了测定。结果表明：到斑马鱼受精卵胚胎发育10
8、h为止，未检测到zfAng1和zfTie2的表达；在胚胎发育第12小时可检测到zfAng1在斑马鱼胚胎头部背侧和zfTie2在头部腹侧的表达；在第16小时zfAng1主要表达于前脑、后脑和尾芽，而zfTie2主要表达于前脑、中脑前部和尾芽的腹前侧；
