haspin的小分子抑制剂在黑色素肿瘤细胞中的抗肿瘤作用

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1、Haspin的小分子抑制剂在黑色素肿瘤细胞中的抗肿瘤作用专业学位类别：药学硕士作者姓名：韩丽丽指导教师：代军副教授天津大学药物科学与技术学院二零一七年五月天津大学硕士学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得天津大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作

2、者完全了解天津大学有关保留、使用学位论文的规定。特授权天津大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。（保密的学位论文在解密后适用本授权说明）学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日摘要背景：黑色素肿瘤是一种异质性、恶性肿瘤，它对目前的临床治疗水平有很大的挑战性。近来，针对致癌性的丝裂原相关蛋白激酶（MAPK）通路的靶向治疗方法在延长晚期黑色素肿瘤病人的存活时间方面已经显现出了很大的提高。然而，仍然急需

3、探索出新的治疗措施来克服现有的治疗方法存在的耐药性以及提高其治疗效果。Haspin（单倍体精细胞特异的核蛋白激酶）属于一类特异的正常的有丝分裂进程中所必需的激酶。与其它有丝分裂激酶的抑制剂相比，haspin抑制剂的抗肿瘤的潜能还没有被完全挖掘出来。本课题目的是检验haspin的小分子抑制剂（CHR-6494）在黑色素肿瘤细胞中的作用。方法：Haspin抑制剂CHR-6494以单药形式或者与MEK抑制剂联合使用时的抗肿瘤的活性在一系列的黑色素肿瘤细胞中得到测试。实验基于：1)用结晶紫染色方法检测细胞活性；2）通过检测caspase3/7的活性以及

4、用免疫印迹法检测裂解的PARP的水平；3）利用流式细胞术分析细胞周期；4）通过划痕实验以及transwell实验来分析细胞转移能力。结果：通过实验我们发现，CHR-6494单独使用能以剂量依赖的方式抑制几类黑色素肿瘤细胞系的生长。这种生长抑制同时又伴随着凋亡的增加。更重要的是，CHR-6494与MEK抑制剂(曲美替尼，GSK-1120212)同时使用，在抑制野生型突变和BRAFV600E突变的黑色素肿瘤细胞的活性方面起到了叠加的效果，同时使细胞凋亡也很大程度增加。与任意其一试剂相比，联合使用这两个小分子抑制剂可以更大程度地抑制黑色素肿瘤细胞的转

5、移能力。结论：这些结果说明，haspin抑制剂可以被考虑作为一个选择性的抗肿瘤的靶点。此外，用小分子抑制剂同时抑制haspin和MEK激酶的活性可以作为一个全新的治疗措施从而提高临床上治疗黑色素肿瘤的效果。关键词：黑色素肿瘤，haspin激酶，联合疗法I天津大学硕士学位论文ABSTRACTBackground:Melanomaisaheterogeneousmalignancythatpresentsanimmensechallengeintherapeuticdevelopment.Recentapproachestargetingtheon

6、cogenicmitogen-activatedproteinkinase(MAPkinase)pathwayshaveshowntremendousimprovementintheoverallsurvivalofpatientswithadvancedmelanoma.However,thereisstillanurgentneedforidentificationofnewstrategiestoovercomedrugresistancesandtoimprovetherapeuticefficacy.Haspin(HaploidGer

7、mCell-SpecificNuclearProteinKinase)belongstoaselectedgroupofmitotickinasesandisrequiredfornormalmitosisprogression.Incontrasttoinhibitorsofothermitotickinases,antitumorpotentialofhaspininhibitorshasnotbeenwellexplored.Herein,weaimtoexamineeffectsofCHR-6494,asmallmolecuLeinhi

8、bitorofhaspin,inmelanomacells.Methods:Anti-tumoractivitiesofthehaspininhibi