急性心肌缺血大鼠心肌中at1-at2的表达变化

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1、急性心肌缺血大鼠心肌中AT1/AT2的表达变化：刘世丽康劲松王伟伟钟加藤曲仙智于慧美张勇刘宁李洪岩【摘要】目的探讨急性心肌缺血大鼠心肌组织中肾素-血管紧张素系统（RAS）的表达变化。方法通过结扎大鼠冠状动脉左前降支复制急性心肌缺血模型。采用RTPCR方法测定心肌组织中血管紧张素原（AGT）、血管紧张素转换酶（ACE）、血管紧张素1型受体(AT1)/血管紧张素2型受体(AT2)及水通道蛋白4（AQP4）mRNA的表达。结果与假手术组相比，急性心肌缺血组大鼠心肌组织中AGTmRNA的变化不明显，ACE及AT1mRNA的表达明显降低(P＜0.05)，AT2及AQP4mRNA的表达明显升高(P＜0.

2、05)。结论局部RAS及AQP4参与了急性心肌缺血的过程。【关键词】肾素血管紧张素系统；心肌缺血；血管紧张素1型受体；血管紧张素2型受体；水通道蛋白4研究表明，大多数肾素血管紧张素系统(reninangiotensinsystem，RAS)的组分可以在心肌、脑、肾脏、血管等组织中生成，而局部RAS可以通过自分泌、旁分泌和胞内分泌方式独立影响器官功能，并在某些心血管疾病如缺血性心肌病、高血压、心肌肥厚、充血性心衰等发生发展中起重要作用〔1〕，但其具体机制不十分清楚。本研究通过结扎大鼠冠状动脉前降支复制急性心肌缺血模型，采用RTPCR法测定心肌组织RAS系统中血管紧张素原（AGT）、血管紧张

3、素转换酶（ACE）、血管紧张素1型受体(AT1)、血管紧张素2型受体(AT2)及水通道蛋白4（aquaporin4，AQP4）的mRNA表达，进一步探讨局部RAS系统在大鼠急性心肌缺血过程中的作用。　　1材料与方法　　1.1药品与试剂　　琼脂糖（北京鼎国生物技术有限公司），焦磷酸乙二酯（DEPC）、溴化乙锭（EB）（美国Sigma），Trizol（美国Invitrogen公司），AMV逆转录酶、OligodT、dNTPs、TaqDNA聚合酶和DL2000DNAMarker（日本Takara公司）。　　1.2实验动物及分组　　健康g/kg）腹腔麻醉大鼠并固定在手术板上。常规消毒左侧胸部，剪开皮肤

4、，按肌肉层次分离暴露胸壁。在左侧4、5肋间暴露心脏。以肺动脉圆锥及左心耳交界处的左冠状动脉主干为标志，用6/0无损伤缝合线穿过做心耳下缘的心肌浅层，结扎冠状动脉左前降支(假手术组只穿线不结扎)。丝线逐层缝合肌肉、皮肤。　　1.4RTPCR检测心肌组织中AGT、ACE、AT1、AT2及AQP4mRNA的表达　　参照Trizol试剂盒的方法提取心肌组织总RNA。采用逆转录酶和OligodT18引物将总RNA反转录为cDNA,进行PCR反应。AGT上游引物：5′TTGTTGAGAGCTTGGGTCCCTTCAC3′，下游引物：5′CACAGACACTGAGGTGCTGTTGTCCA3′，待

5、扩增产物长度为265bp，退火温度为58℃；ACE上游引物：5′GCAGAACTTCACTGACCAAAAG3′，下游引物：5′TCAAAGGAGGGGGACTCATA3′，待扩增产物长度为383bp，退火温度为55℃；AT1上游引物：5′GCACAATCGCCATAATTATCC3′，下游引物：5′CACCTATGTAAGATCGCTTC3′，待扩增产物长度为445bp，退火温度为53℃；AT2上游引物：5′GTGTCCAGCATTTACATCTTCA3′，下游引物：5′CACCAAACAAGGGGAACTAC3′，待扩增产物长度为275bp，退火温度为53℃；AQP

6、4上游引物：5′TTGGACCAATCATAGGCGC3′，下游引物：5′GGTCAATGTCGATCACATGC3′，待扩增产物长度为214bp，退火温度为57℃；GAPDH作为内对照，上游引物：5′GGGTGATGCTGGTGCTGAGTATGT3′，下游引物：5′AAGAATGGGAGTTGCTGTTGAAGTC3′，待扩增产物长度为617bp，退火温度为58℃。引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。PCR反应条件为94℃变性45s，退火45s（扩增产物不同，退火温度不同），72℃延伸45s，30个循环。取PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，采用上海天能科技有限公司GIS

7、凝胶成像系统照相，特异性条带的丰度值用GIS图像分析系统处理。　　1.5统计学处理　　实验数据采用x±s表示，其中电泳条带密度值以灰度×面积/参照物的值表示。采用SPSS11.0统计软件包处理，组间比较用方差分析。　　3讨论本实验证明正常大鼠的心肌细胞中均有AGT、ACE、AT1、AT2mRNA的表达。这与Anversa等〔2〕报道的成年大鼠心室肌细胞含有产生血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的各种成分结果