自凝聚标签与spm融合表达载体的构建及重组牛γ干扰素的表达与纯化

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1、万方数据张旺：自凝聚标签与SPM融合表达载体的构建及重组牛Y干扰素表达与纯化竺大地促进了重组蛋白的高效纯化，为不同蛋白的亲和纯化提供更多选择。亲和标签因参考依据的不同，主要有两种分类方法：(1)根据所结合配基大小的不同，亲和标签可分为两类：一类是与蛋白配基结合的短肽标签，如结合固定化的钙调蛋白的CBP标签等，另一类是与小分子配基结合的小肽或蛋白标签，如与固定化谷胱甘肽相结合的GST标签、与固定化金属离子相结合的His标签等：(2)而根据分子量大小的不同，亲和标签又可分为两类：一类是与小分子量配基相结合的蛋白标签，O口GST、MBP等，另一类是与固定化配基相结合的短肽标签，女NHistag

2、、FLAGtag、StreptagII等。参考文献：【1】1KorfU，KohlT，ZandtHv，ela1．Large—scaleproteinexpressionforproteomeresearch．Proteomics，2005，5：3571．3580。【2】CooperEH，TurnerRWebbJR，ela1．Fastliquidproteinchromatographyscale-upproceduresforthepreparationoflowmolecgLarweightproteinsfromurine．JChromatogr,1985，327：269—277【3]

3、PorathJ．Salt-promotedadsorption：recentdevelepments．JChromatogr,1986，376：331-341[4】NeverovaI，VanEykJE．Applicationofreversedphasehighperformanceliquidchromatographyforsubproteomicanalysisofcardiacmuscle．Proteomics，2002，2(1)：22—31．[5】HageDS．Affinitychromatography：areviewofclinicalapplications．ClinCh

4、em，1999，45(5)：593·615[6]LichtyJJ，Malecki儿，AgnewHD，ela1．Comparisonofaffinitytagsforproteinpurification．ProteinExprPurlf,2005，41(1)：98-105．【7]ChoHJ，LeeY，ChangRS，elai．Maltosebindingproteinfacilitateshigh—levelexpressionandfunctionalpurificationofchemokinesRANTESandSDF-lafromEscherichiacoli．ProteinEx

5、prPurif,2008，6001：37—45．万方数据扬州大学硕士学位论文综述二：自凝聚标签与自剪切元件在蛋白纯化中的应用10__一1．自凝聚标签及自剪切元件的研究进展随着小分子抗体等非糖基化蛋白药物的迅猛发展，利用原核系统表达重组蛋白在制药工业中的应用变得越来越广泛，然而外源基因原核系统表达时目的蛋白多以包涵体形式存在。蛋白以包涵体形式表达有很多优点，如蛋白稳定、产量高、成本低、易纯化等，但同时由于蛋白质理化性质的复杂性，要获得高收率的功能蛋白仍需要不断探索变复性及纯化工艺，因此在一定程度上限制了表达体系在实际生产中尤其是蛋白类药物研发中的应用。1．1自凝聚标签的研究进展2005年S

6、imona等【1】从包涵体中不通过变性．复性过程就提取出了有生物活性的hG．CSF蛋白，同年Elena等[2】提出不是所有包涵体都是无生物活性的，随后人们陆续‘3叫证实了这种功能性包涵体(或称非传统包涵体)的存在。由于功能性包涵体本身具有生物活性，不需要经过复杂的变复性过程就能获得，因此引起了学术界和工业领域研发者的广泛兴趣。1．1．1功能性包涵体1989年Wbrrall等【7】在p．半乳糖苷酶的研究中，获得了具有生物活性的包涵体蛋白，首次提出包涵体蛋白也含有一定正确的折叠结构。1991年Kostas等‘8】也从包涵体中获得了有酶活性的蛋白。遗憾的是这两篇文章的刊登在当时并没有引起人们对

7、功能性包涵体的广泛关注。直到2005年，Simona等‘91通过对hG．CSF包涵体的研究，发现包涵体中也含有一定正确折叠的活性蛋白，并且证实了非变性条件下溶解获得的蛋白具有生物活性和正确的结构，还证实其特性与培养温度有很大关系；同年Elena等‘101通过对携带绿色荧光、蓝色荧光的包涵体以及具有酶活性的包涵体(见图1)进行研究，证实这样的包涵体具有生物活性和正确的结构。随后这种具有生物活性、不溶的功能性包涵体受到了人们的关注，并且