骨髓细胞特异性酯酶染色标准操作程序

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1、骨髓细胞特异性酯酶染色标准操作程序1.检验目的急性白血病鉴别；鉴别嗜碱性细胞(阴性或弱阳性)与组织嗜碱细胞(阳性)。2.检测原理（包括结果计算）氯乙酸AS-D萘酚被细胞内酯酶水解，产生萘酚AS-D，再与六偶氮新品红作用，生成不溶性红色沉淀，定位于细胞质内。3.性能特征无。4.标本要求（包括病人准备、容器、样本类型等）4.1病人准备：了解病人是否对局麻药有过敏史。凝血因子严重缺陷引起的出血性疾病，穿刺部位有炎症或有畸形，晚期妊娠妇女作骨髓穿刺时要慎重。4.2标本类型：骨髓。4.3标本容器：洁净载玻片。4.4标本存放:4.4.1未检测标本的存放：放于细胞

2、室未检测标本架上。4.4.2已检测标本的存放：骨髓存片柜，保存10年以上。4.5标本运输:室温条件下运输。4.6标本拒收标准：参照《采集手册》。5.仪器和试剂5.1试剂名称:氯乙酸AS-D萘酚酯酶（AS-DNCE）染色液5.2试剂来源：：上海太阳生物技术有限公司5.3试剂准备：试剂为即用式。5.4试剂贮存：2～8℃保存，有效期九个月。5.5试剂组成：Ⅰ液：30mg×5,Ⅱ液：30ml×5。5.5.l甲醛-丙酮缓冲液(pH6.6)5.5.20.067mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.6)Na2HP048.8gKH2P040.9g蒸镏水1000ml5.5.

3、340g/L新品红(newfuchsin)新品红1g2mol/L盐酸液25ml(20±5)℃贮存，避免阳光照射，此液可长期保存。5.5.440g/L亚硝酸钠制液，4℃保存，每周新鲜配制。5.5.5六偶氮新品红液：使用前等体积新品红和40g/L亚硝酸钠液立即混合，反应1min。5.5.6氯乙酸AS-D萘酚酯酶氯乙酸AS-D萘酚5mgN,N-二甲基在甲酰胺2.5ml5.5.7底物液六偶氮新品红液0.2ml氯乙酸AS-D萘酚液2ml0.067mol/L磷酸盐缓冲液38ml最终pH7.2-7.4。6.环境和安全此试剂为体外诊断用，存在一定的刺激性和毒性；不要

4、入口，避免和眼睛，皮肤或衣服接触，一旦接触，立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟，接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。7.检测前准备在玻片头端贴上标签编号。8.校准/定标无。9.质量控制无。10.标本检测10.1新鲜涂片用冷甲醛-丙酮液固定30s,4℃。10.2水洗。10.3底物液孵育30min,(20±5)℃。10.4水洗。10.5苏木素液复染10min，水洗。10.6结果判断：阳性反应为红色颗粒，定位于细胞质中。11.生物参考区间分化好的原粒细胞至成熟粒细胞均为阳性反应，嗜酸粒细胞阴性或弱阳性。淋巴细胞为阴性。巨核细胞、血小板、幼红细胞阴性。单

5、核细胞系阴性，偶见弱阳性反应。组织嗜碱细胞为阳性。Auer小体也呈阳性。12.危急值无。13.临床意义13.1急性白血病鉴别：急性粒细胞白血病时原粒细胞和幼稚粒细胞为阳性反应，急性淋巴白血病为阴性，急性单核细胞白血病-般为阴性反应，对于某些POX反应阳性的单核细胞白血病鉴别意义更大。13.2.鉴别嗜碱性细胞(阴性或弱阳性)与组织嗜碱细胞(阳性)。14.注意事项（干扰、潜在变异、超检测范围结果的处理等）14.1CAE虽为粒细胞特异性酯酶，但粒系早期细胞中该酶反应不如MPO敏感，因此AML-M1的典型细胞化学模式常为MPO+、CAE-。14.2严格遵守操

6、作规程，如增加温度和pH可导致氯乙酸萘酚分解，从而在细胞内产生非特异性酯酶反应。14.3底物液配制后要及时使用，以免失效或降低阳性强度。14.4ICSH推荐法采用新品红，有的实验室选用固紫(fastblueBB)或固蓝(fastgarnetGBC)，试剂也易购到。14.5染色后应及时观察，长期保存会逐渐褪色。15.参考文献15.1《全国临床检验技术操作规程》（第4版）16.记录表格无