酸性α-醋酸萘酚酯酶染色液.docx

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1、酸性α-醋酸萘酚酯酶染色液（ANAE）预期用途：供骨髓细胞图片及血液细胞图片染色检查检验原理：盐酸副品红与亚硝酸钠反应生成六偶氮副品红（重氮盐），底物α-醋酸萘酚在酯酶的作用下水解α-萘酚，α-萘酚再与重氮盐偶联，生成棕红色沉淀，定位于细胞浆中，本染色液对酯酶染色无特异性，故又称作非特异性酯酶染色主要组成成分：组成主要成分1,、固定剂（A液）甲醛2、偶氮溶液(B液)副品红3、亚硝酸钠溶液(C液)亚硝酸钠4磷酸盐缓冲溶液(D液)磷酸盐5、α-醋酸萘酚溶液（E液）α-醋酸萘酚6、甲基绿溶液（F液）甲基绿7、

2、NaF溶液氟化钠储存条件及有效期：有效期：一年储存条件：本试剂盒应储存于2℃-8℃低温环境。样本要求：新鲜骨髓细胞涂片及血液细胞涂片（切勿使用抗凝血）检验方法：一、工作液配制（一）、浸染工作液配制（一份浸染工作量是33ml,至少可同时放置8-10张涂片）1、重氮盐溶液的准备：B液1ml与C液1ml彻底混匀，静置2分钟；2、染缸（自备染液缸）内加入D液40ml；3、将重氮盐溶液倒入染缸内，混匀4、再加E液1ml入染缸内，轻轻混匀B液C液D液E液NaF液A染缸1ml1ml30ml1ml-B染缸（抑制试验）1

3、ml1ml30ml1ml1ml（二）滴染工作液配制（一份滴染工作液是1.65ml）使用器材：一次性塑料试管、微量移液器，一次性吸嘴，滴管。操作：于试管内加B液50μL，C液50μL混匀，静置1分钟，再加D液1.5ml，E液50μl,混匀，静置2分钟备用（NaF抑制试验加NaF液1滴）。B液C液D液E液NaF液A染缸50μL50μL1.5ml50μL-B染缸（抑制试验）50μL50μL1.5ml50μL1滴一、染色步骤1、干燥涂片，直接滴加工作液做第二步或滴加A液（用前恢复室温，并充分摇匀）固定约30-6

4、0秒，蒸馏水冲洗，待干或滤纸吸干（涂片不固定直接做ANAE染色，阳性反应强于固定者）；2、滴加或浸入工作液布满涂片（37℃）孵育分钟，蒸馏水冲洗，待干或滤纸吸干3、F液复染1-2分钟，蒸馏水冲洗，干后镜检参考范围：1.单核细胞系统：呈阳性反应，其反应可被氟化钠抑制。2.粒细胞系统：各期粒细胞多呈阴性反应，有时少数粒细胞可呈弱阳性反应，其反应不被氟化钠抑制。3.巨核细胞及血小板为阳性。4.淋巴细胞多呈点状阳性，部分淋巴细胞及浆细胞为阴性反应。5.单核细胞源性的组织细胞、巨噬细胞呈强阳性反应，高雪氏细胞、海

5、蓝组织细胞为阳性。6.幼红细胞呈阴性反应。检验结果的解释细胞浆内红色或棕红色颗粒为阳性。①点样型：主要见于成熟T淋巴细胞，阳性反应呈棕色或棕红色1-4个圆形、团块、边界清楚的大点状颗粒定位于细胞浆中。②弥散型：阳性反应呈棕红色尘粒状、弥散分布，可位于细胞浆的某一局部，边界不清。③单核细胞型：阳性反应为均匀棕红色弥漫性遍布整个细胞浆。检验方法的局限性仅限于形态学染色观察使用注意事项1、5Tests只限滴染使用2、本染色又名酸性非特异性酯酶染色。3、使用前应恢复室温，用前请摇匀试剂；B,C液请充分混匀，所用

6、容器必须洁净。4、工作液临用前新鲜配制，应采用新鲜涂片染色。5、每次试剂使用后，请迅速盖好密封保存，以免挥发及影响效果6、本品应由专业人士使用及进行结果的判读7、使用前应详细阅读使用说明书及产品包装标识，在有效期内使用，并做好个人卫生防护8、生产批号、效期见外包装9、用后应按医院或环保部门要求处置废弃物