骨髓细胞碱性磷酸酶染标准操作程序

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1、骨髓细胞碱性磷酸酶染色标准操作程序1.检验目的类白血病与慢性粒细胞白血病的鉴别、急性细菌性感染与病毒性感染的鉴别、再生障碍性贫血与阵发性睡眠性血红蛋白尿鉴别。2.检测原理在碱性条件下，细胞内碱性磷酸酶可使萘酚AS-BI磷酸盐水解，释出磷酸与萘酚，后者偶联重氮盐生成有色产物，定位于细胞质中。3.性能特征无。4.标本要求（包括病人准备、容器、样本类型等）4.1病人准备：了解病人是否对局麻药有过敏史。凝血因子严重缺陷引起的出血性疾病，穿刺部位有炎症或有畸形，晚期妊娠妇女作骨髓穿刺时要慎重。4.2标本类型：

2、骨髓。4.3标本容器：洁净载玻片。4.4标本存放:4.4.1未检测标本的存放：放于细胞室未检测标本架上。4.4.2已检测标本的存放：骨髓存片柜，保存10年以上。4.5标本运输:室温条件下运输。4.6标本拒收标准：参照《采集手册》。5.仪器和试剂5.1试剂名称:碱性磷酸酶（NAP）染色液5.2试剂来源：上海太阳生物技术有限公司5.3试剂准备：试剂为即用式。5.4试剂贮存：2～8℃保存，有效期九个月。5.5试剂组成：Ⅰ液：30mg×5,Ⅱ液：30ml×5。5.5.1丙酮-枸橼酸固定液(pH4.2～4.5

3、)0.03mol/L枸橼酸钠液32ml0.03mol/L枸橼酸液168ml纯丙酮300ml边加边搅拌。5.5.2缓冲液(pH9.4～9.6)2氨基-2-甲基-1，3-丙二醇10.5g蒸馏水500ml此为贮存液4℃保存O.1mol/L盐酸5ml上述2氨基-2-甲基-1,3-丙二醇贮存液25ml蒸镏水稀释至100ml4℃贮存，可保存6个月，用前使温度达室温。5.5.3底物液萘酚AS-BI磷酸盐5mg固紫B盐(fastvioletBsalt)40mg缓冲液(pH9.4～9.6)60ml混匀，过滤后使用，新

4、鲜配制。5.5.4苏木素复染液。6.环境和安全此试剂为体外诊断用，存在一定的刺激性和毒性；不要入口，避免和眼睛，皮肤或衣服接触，一旦接触，立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟，接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。7.检测前准备在玻片头端贴上标签编号。8.校准/定标无。9.质量控制无。10.标本检测10.1新鲜涂片以丙酮-枸橼酸液固定30s。10.2充分水洗。10.3在底物液中作用15min。10.4苏木素复染5～8min。10.5水洗，晾干，镜检。10.6结果判断：阳性颗粒为鲜红色。一般以积分报告

5、结果，根据100个中性粒细胞阳性颗粒进行0-4+计分。细胞分值染色特点:无颗粒+稍有颗粒2+中等程度颗粒3+多数颗粒4+充满颗粒11.生物参考区间成熟中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）的积分值为积分30～130分12.危急值无。13.临床意义13.1急性细菌性感染积分增高，病毒性感染积分多正常或减低。13.2再生障碍性贫血积分常增高，阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)和骨髓增生异常综合征(MDS)积分常减低。14.注意事项14.1涂片应新鲜，厚薄适宜，及时固定。14.2若无2-氨基-2甲基-1，3-丙二醇

6、，也可用巴比妥缓冲液(pH9.2)或0.2mol/L的Tris缓冲液(pH9.2)代替。14.3EDTA会抑制NAP的活性，故不可用EDTA抗凝血涂片，只能用不抗凝的静脉或皮肤穿刺血测定。14.4底物液配制后要及时使用，以免失效或降低阳性强度。14.5每次染色应有阳性对照。15.参考文献15.1《全国临床检验技术操作规程》（第4版）16.记录表格无