海人藻酸致痫大鼠心肌细胞erk表达实验探究

《海人藻酸致痫大鼠心肌细胞erk表达实验探究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、海人藻酸致痫大鼠心肌细胞ERK表迖实验探究［摘要］目的研究海人藻酸致痫大鼠心肌细胞ERK表达情况。方法采用立体定位仪下杏仁核内注射海人藻酸方法制备癫痫动物模型，在大鼠癫痫发作后不同时程，快速制备心脏组织标本，进行免疫组化及染色，用Image_ProPlus像分析软件，计算大鼠心肌细胞ERK表迗灰度值的均数和标准差，观察不同时程心肌细胞ERK表迖情况。结果致癫痫组大鼠心肌细胞ERK表达于癫痫发作后1/2小时开始增加，灰度值为4735.86±172.43，2小时心肌组织ERK的表达迗到高峰，灰度值为12764.71±178.45，与对

2、照组相比P值均＜0.05,随后逐渐下降；至癲痫发作6小时，心肌组织ERK表达基本消失，灰度值为2389.78±185.64，与对照组相比P〉0.05。结论ERK在癫痫所引起的脑心综合征中有表迗［关键词］癫痫；心肌细胞；细胞外信号调节激酶中图分类号：R54文献标识码：A文章编号：1009_816X(2008)01_0015_03引起脑心综合征的原因很多，颞叶癫痫是最常见之一但国内关于颅内疾患所致的脑心综合征的报导，少有由癫痫引起脑心综合征的临床报道。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)作为胞内信号转导系统，在海人藻酸(KA)致痫模型中以及

3、在心血管系统中均有重要意义，然而MAPK在癫痫引发脑心综合征中是如何发挥作用，尚无公认的定论。有研究报道，在KA侧脑室内注射致痫模型中，痫性发作l/2h后ERK(细胞外信号调节激酶)、JNK、p38均升高，ERK持续升高约3h，而JNK和p38在2h后即恢复正常[1],本文对ERK在癫痫所引起的脑心综合征中的表达进行探讨。1材料与方法1.1主要仪器和试剂：动物大脑立体定位仪(BUNKY0_KV113T0KY0)_日本;LMS_2B型二道生理记录仪_成都。MAPK1/2(抗体)及KA购自美国sigma公司。1.2动物分组：实验动物选

4、用健康雄性Wistar大鼠42只，体重约250克，均购自吉林大学新民校区实验动物部，其中正常对照组大鼠7只，致痫组大鼠35只，按海人藻酸致痫后癲痫发作即刻、1/2小时、2小时、4小时及6小时分为5组，每组各7只。1.3模型建立：将KA溶解在PBS中性缓冲液中，配制成浓度为1毫克/毫升的液体。用10%水合氯醒0.33ml/kg体重腹腔麻醉大鼠。将大鼠两外耳道固定于立体定位仪上，并将水平线调零。取头颅正中菱形切口，暴露颅骨及前囟、后囟，将立体定位仪正中线调零。右侧杏仁核基底外侧核的坐标位置为前囟后2.5mm，旁开5.Omm，烦骨表面下

5、8.0mm。用小牙钻钻透顶骨至硬脑膜处，一部分动物在KA注射前，预先在左侧海马CA3区包埋双极电极。按照上述右侧杏仁核坐标，注入海仁藻酸lul，空白组为生理盐水lul，注药后留针约5min左右，缓慢退出。然后，缝合切口，将大鼠放在敞口有机玻璃罩中，按Racine分级法，将大鼠行为分为以下5级：0级_正常行为状态；I级：湿狗样颤动，面部痉挛抽动，包括眨眼、动须、节律性咀嚼等；II级：I级加节律性点头；III级：II级加前肢痉挛；IV级：站立并伴双侧前肢痉挛；V级：持续站立、倾倒、失平衡、四肢抽动。达到以下两个条件为模型成功。①按Ra

6、cine标准分级，大鼠致痫后出现III级以上发作；②鼠海马深部电极脑电图出现正常波上棘波和尖波放电。1.4免疫组化及染色：分别于大鼠癫痫发作后即刻、l/2h、2h、4h及6h后，以10%水合氯醛麻醉大鼠，快速取心脏标本，置于10%中性缓冲福尔马林固定液中1.5小时后，弃去固定液，准备酒精脱水、石蜡包埋及免疫组化及染色。切片经HE染色后拍照，在显微镜下放大20倍后再拍照，每张切片选取10个视野，选定其中某一细胞作为标准，用Image_ProPlus图象分析软件测定心肌组织ERK表达的灰度值。1.5统计学处理：所有实验数据用x_±s表

7、示。统计学分析，各组间比较采用方差分析，成组数据的比较采用t检验，P<0.05为有统计学意义。2结果2.1海人藻酸致痫大鼠的海马深部电极脑电改变正常大鼠脑电波形，频率以5〜10赫兹为主，波幅小于700Mv,见图1。KA注射后各组大鼠脑电波均出现多种形式的癫痫性放电。典型波形有单棘波、多相棘波、双相棘波、棘慢波、尖波发作性节律波、发作后抑制等，见图2。2.2致癫组大鼠心肌细胞不同时程ERK表迗的病理学改变，见图3〜7。2.3致痫组大鼠心肌细胞不同时程ERK表迗的灰度值测定：见表1。3讨论心脏和中枢神经系统相互关联，正常情况下脑通过自

8、主神经系统调节心脏活动而维持一种稳态，当神经系统发生病变时会打破这种稳态。MAPK是一个重要的细胞内信号传导酶家族。其成员ERK与细胞生长、增殖、分化及凋亡，甚至保护作用有关。心肌细胞凋亡是心肌细胞的一种程序性细胞死亡，它在心脏的正常发育过程中及心