氧化苦参碱对青霉素致痫大鼠海马组织erk信号转导通路的研究

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1、宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要氧化苦参碱对青霉素致痫大鼠海马组织ERK信号转导通路的研究摘要目的研究氧化苦参碱(Oxymatrine，OXY)对青霉素(Penicillin，PEN)致痫大鼠海马组织丝裂原激活蛋白激酶（mitogen-activatedproteinkinase，MAPK）信号转导通路中的主要成员细胞外信号调节蛋白激酶ERK1/2(extracellularsignal-regulatedkinase1/2)通路的活化形式—磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)和N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-asPartate，NMDA）受

2、体亚型NR2B表达的变化规律及其意义。分析在此途径中大鼠血清肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、白介素－8(IL-8)含量变化，旨在探讨OXY抗癫痫作用的可能机制。方法1.SD大鼠随机分为生理盐水对照组（NS）、青霉素致痫组（PEN）、苯巴比妥钠阳性药物对照组（PBS）、氧化苦参碱组（OXY）。2.采用HE染色法观察海马神经元病理学改变；应用免疫组化法检测各组大鼠致痫1h、2h、4h、6h和8h各时间点海马组织内p-ERK1/2和NR2B免疫阳性神经元数量的变化；应用Westernblot法进一步检测各组大鼠海马各时间点

3、两种蛋白表达；应用放射免疫分析法测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)和白介素-8(IL-8)的含量变化。结果1.海马神经元病理学改变。光镜观察各组大鼠各时间点海马神经元HE染色标本：NS组大鼠海马神经元呈圆形或椭圆形，细胞膜、细胞核结构完整。PEN组大鼠海马神经元损伤最严重，损伤区表现为细胞核固缩，核仁不明显，胞浆浓缩深染，神经元发生不同程度的变性坏死。PBS组大鼠海马可见散在神经元损伤，损伤程度较PEN组轻。OXY组大鼠海马神经元可见少部分变性或坏死的细胞，损伤程度较PEN组轻。2.磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶

4、I宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要(p-ERK1/2)及NR2B免疫组化染色结果。NS组大鼠海马各区p-ERK1/2仅在胞浆内表达弱阳性，有少量的NR2B表达；PEN致痫1h后p-ERK1/2表达迅速增强，在神经元的胞核、胞浆内都有表达，NR2B阳性神经元与NS组比较数量明显增多(P﹤0.05)。在PEN致痫2hp-ERK1/2阳性细胞数量达到最高值，4h阳性神经元数量回降，6-8h继续回降，但仍高于NS组；在PEN致痫6hNR2B阳性细胞数量达到最高值，8.0hNR2B阳性神经元数量有所回降，但仍高于NS组；PBS组p-ERK1/2和NR2B阳性细胞数量明

5、显低于PEN组相应时间点(P﹤0.05)；OXY组p-ERK1/2和NR2B阳性细胞数量明显低于PEN组相应时间点(P﹤0.05)；OXY组与PBS组比较，差异无统计学意义。3.磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(p-ERK1/2)和NR2BWesternblot结果。经光密度定量分析显示：NS组大鼠海马表达p-ERK1/2蛋白很少，而PEN致痫1hp-ERK1/2蛋白含量开始升高，2h蛋白含量达到最高值，4h逐渐回降，p-ERK1/2表达趋势与免疫组化结果一致。PEN组与NS组相应时间点比较p-ERK1/2蛋白含量显著增高（P﹤0.05）；PBS组p-ERK1/2蛋白

6、含量明显低于PEN组和OXY组；OXY组p-ERK1/2蛋白含量明显低于PEN组。PEN致痫1hNR2B蛋白含量升高，6h蛋白含量达到最高值，8h逐渐回降，NR2B表达趋势与免疫组化染色结果一致。PEN组与NS组相应时间点比较NR2B蛋白含量显著增高（P﹤0.05）；PBS组相应时间点NR2B蛋白含量明显低于PEN组；OXY组相应时间点NR2B蛋白含量明显低于PEN组。OXY组与PBS组相应时间点比较，差异无统计学意义。4.各组大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)含量变化。OXY组与PEN

7、组相应时间点比较，大鼠血清中TNF-a、IL-1、IL-6、IL-8含量明显降低且有显著性差异（P﹤0.05）；与PBS组相比，无显著性差异。结论1.OXY可以延长PEN致痫大鼠癫痫发作潜伏期与发作程度，可以改善神经细胞的痫性损害程度。2.PEN致痫可激活大鼠海马细胞内ERK通路，该通路可能参与了癫痫发作后大鼠海马组织的痫性损害。而OXY可减少ERK活化II宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要使NR2B表达下降，从而发挥抗癫痫作用。3.OXY可降低PEN致痫大鼠血清中细胞因子TNF-a、IL-1、IL-6、IL-8的含量，说明OXY抗癫痫作用机制可能与某些细胞因

8、子相关。关