抑制坏死性凋亡对单侧输尿管结扎肾脏保护作用的初步研究

《抑制坏死性凋亡对单侧输尿管结扎肾脏保护作用的初步研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、授予单位代码10089学号或申请号20152279中国图书分类号R361HebeiMedicalUniversity硕士学位论文学术学位抑制坏死性凋亡对单侧输尿管结扎肾脏保护作用的初步研究研究生：肖夏导师：任韫卓教授杜春阳副教授专业：病理学与病理生理学二级学院：基础医学院2018年3月目录中文摘要…………………………………………………………………1英文摘要…………………………………………………………………4英文缩写…………………………………………………………………8研究论文抑制坏死性凋亡对单侧输尿管结扎肾脏保护作用的初步研究前言…………………………………………………………………9材料与方法……

2、……………………………………………………10结果…………………………………………………………………19附图…………………………………………………………………21讨论…………………………………………………………………37结论…………………………………………………………………41参考文献……………………………………………………………41综述坏死性凋亡在炎症中作用的研究进展……………………………45致谢………………………………………………………………………61个人简历…………………………………………………………………62中文摘要抑制坏死性凋亡对单侧输尿管结扎肾脏保护作用的初步研究摘要目的：肾间质炎症

3、纤维化是多种慢性肾病进展为终末期肾病的共同病变过程和病理基础，其发病机制迄今尚未阐明，通常认为是多因素综合作用的结果，其中细胞死亡对炎症反应及后续纤维化发挥关键作用。坏死性凋亡是一种新型的细胞死亡模式，它具有细胞质膜崩解、细胞器肿胀和线粒体功能丧失等细胞坏死的主要特征，同时又是一种可调控的，caspase非依赖的程序性细胞死亡。大量研究显示坏死性凋亡能诱发、驱动炎症反应。坏死性凋亡在急性胰腺炎、缺血性损伤、神经退行性变等小鼠模型,以及临床克罗恩病中发挥重要作用。此外，坏死性凋亡在多种肾脏疾病，如顺铂诱导的肾损伤、肾缺血再灌注、肾移植以及肾大部切除大鼠慢性肾纤维化等多种动物模型中也起到关键作用。

4、在本研究中，我们应用单侧输尿管结扎(unilateralureteralobstruction,UUO)建立肾间质炎症纤维化模型，检测小鼠UUO模型中是否存在坏死性凋亡，然后应用坏死性凋亡特异性抑制剂necrostatins-1(Nec-1)进行干预，检测梗阻肾脏中炎症和纤维化分子指标表达情况，旨在探讨抑制坏死性凋亡的肾脏保护作用及可能机制，为临床肾病的治疗提供新思路。方法：1．动物模型建立健康雄性C57BL/6J小鼠按随机区间法分为假手术组(Sham,n=6)、左侧输尿管结扎组(UUO,n=6)、输尿管结扎后经Nec-1治疗组(UUO+Nec-1,n=6)。UUO+Nec-1组自手术日起，每

5、天给予Nec-1(1mg/kg/day)腹腔注射治疗。Sham组除不结扎输尿管外同模型组做相同处理。2．肾组织取材和指标检测术后7天处死小鼠，留取肾组织于4%多聚甲醛溶液中固定，用于常规病理学染色、免疫组织化学检测；剩余肾组织经液氮速冻，用于提取肾皮质总蛋白和总RNA。免疫组织化学和Westernblot检测受体相互作用蛋白1(receptorinteractingprotein1,RIP1)、受体相互作用蛋白3(receptorinteractingprotein3,RIP3)、混合谱系激酶结构域样蛋白(mixed1中文摘要lineagekinasedomain-like,MLKL)、肿瘤坏

6、死因子α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)、白介素-lβ(Interleukin-1β,IL-1β)、单核细胞趋化蛋白-1(monocytechemotacticprotein1,MCP-1)、转化生长因子β1(Transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)、α型肌动蛋白(α-smoothmuscleactin,α-SMA)、I型胶原(collagenI,Col1)的蛋白表达,荧光实时定量PCR检测RIP1、RIP3、MLKL、TNF-α、IL-1β、MCP-1、TGF-β1、α-SMA、Col1的基因表达。结果：1．Nec-1改善了UUO引起的

7、肾脏病理损伤HE染色显示，Sham组肾小管结构正常，肾间质未见明显炎细胞增生。UUO组可见单核与淋巴细胞浸润明显，部分近曲小管水肿或萎缩，部分肾小管明显扩张，管腔内可见坏死脱落的上皮细胞。Nec-1治疗后肾间质炎性浸润减少，肾小管上皮细胞肿胀、扩张和坏死程度减轻。Masson染色显示，UUO组肾间质有大量胶原纤维沉积，Nec-1治疗明显减轻了纤维化程度。2．Nec-1降低了UUO引起的坏死性凋亡相