大黄虫丸经旁分泌途径对早期肝纤维化的干预作用.doc

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1、大黄虫丸经旁分泌途径对早期肝纤维化的干预作用作者：成家茂，潘志恒，谢瑶，何宏文，曲怀刚【摘要】目的观察大黄虫丸经旁分泌途径对大鼠肝星状细胞增殖及其表迗TGF-P1基因的影响。方法采用Nycodenz分离液非连续密度梯度离心法同步分离急性CC14损伤模型大鼠和正常大鼠肝的枯否细胞和星状细胞。在制备正常鼠血清和大黄虫丸药物血清的基础上，将它们分别加入KC培养板内作用48h后制备成正常鼠KC条件培养液和损伤鼠KC条件培养液。将NKCCM和KCCM作用于活化的HSC24h后，采用MTT法和3H-TdR掺入法检测HSC增殖的变化；采用半定量RT-PCR法扩增TGF-3ImRNA以检测

2、HSC表达TGF_P1基因的情况。结果旁分泌组各组的HSC增殖幅度及TGF-01基因的相对表达量较正常对照组NKCCM组均明显增加。同时旁分泌组中，含药血清作用的5%，10%和20%KCCM组较无药物血清作用的0%KCCM组HSC的增殖能力及TGF-01基因的相对表达量则下降，且随药物浓度的升高逐渐降低，其组间差别有统计学意义。结论大黄虫丸可明显抑制经旁分泌途径活化的大鼠HSC的增殖及TGF-31基因的表达，且其抗肝纤维化效应与药物剂量间存在一定的依赖关系。【关键词】大黄虫丸肝纤维化肝星状细胞旁分泌Abstract:ObjectiveToobservetheeffectso

3、fDahuangZhechongPillontheproliferationofrathepaticstellatecells(HSCs)activatedbyparacrinepathwayandtheexpressionoftransforminggrowthfactor-beta1(TGF_31)CC14-injuredandnormalratKupffercells(KCs),hepaticstellatecellswereseparatedbynon-continuousdensitygradientcentrifugationofNycodenzmedium.A

4、fterthecommonratandthedrugseraprepared,theywereaddedrespectivelyintoKupffercellcultureplatesfornormalKupffercellsconditionedmedium(NKCCM)andinjuredratKupffercellsconditionedmedium(KCCM)after48h.WeobservedthechangesofproliferativeHSCsbythemethodsofMTTand3H-thymidine(3H-TdR)incorporationassa

5、y,andtheexpressionofTGF-31geneinHSCsbysemi-quantitativeRT-PCRwhenHSCswereactivedfor24hbythoseconditionedallparacrinegroups,themultiplicationofHSCsandtherelativeexpressionofTGF-0lgenewereincreasedmarkedlycomparedtonormalcontrolgroup(P

6、ngPillcanobroliferationofratHcrinepathwayandthegeneinHSCsanddeereinaconcentration一uallydecreasedinalmgroupswithelevatetdiferencesamongalviouslyinhibitthepSCsactivatedbyparaexpressionofTGF-31Liverfasehepaticfibrosisdependentmanner.ibrosis；Keywords:DahuangZhechongPill；Hepaticstellatecell；Par

7、acrine肝纤维化是从各型慢性肝病转化为肝硬化的一个重要病变过程，有效逆转肝纤维化已成为防治肝硬化的重要手段它是一个伴随肝内细胞外基质增多和沉积的瘢痕化过程，在细胞和分子水平上以HSC的活化、转化生长因子31及其下游细胞调节因子活性异常为主要特征［1］。因此，抑制HSC活化和减少肝组织内TGF-P1的表迗是逆转肝纤维化的中心环节。大黄虫丸具有缓中补虚、活血化瘀、通络软坚等功效，以往的临床和实验研究表明该药在防治肝纤维化方面效果明显［2,3］。本实验拟观察大黄虫丸对CC14损伤大鼠肝组织内经旁分泌途径活化的星状细胞