microrna let-7a通过靶向mage-a1抑制乳腺癌增殖、迁移和侵袭的研究

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1、授予单位代码10089学号或申请号10010010060中国图书分类号R655.8HebeiMedicalUniversity硕士学位论文专业学位MicroRNAlet-7a通过靶向MAGE-A1抑制乳腺癌增殖、迁移和侵袭的研究研究生：米蕴喆导师：耿翠芝教授桑梅香教授专业：外科学二级学院：第四医院2018年3月目录中文摘要………………………………………………………………………1英文摘要………………………………………………………………………3英文缩写………………....……………………………………………………6研究论文MicroRNAlet-7a通过

2、靶向MAGE-A1抑制乳腺癌增殖、迁移和侵袭的研究前言…………………………………………..................................7材料和方法……………………………….…....……………………8结果…………………………………………………………………22附图………………………….………………………………………25附表…………………………………..………………………………32讨论………………………………..…………………………………33结论………………………………...…………………………………36参考文献…………………………

3、…...………………………………36综述Let-7家族的研究进展………………………………………………40致谢………………………………………………………………………53个人简历……………………………………………………………………54中文摘要MicroRNAlet-7a通过靶向MAGE-A1抑制乳腺癌增殖、迁移和侵袭的研究摘要MicroRNA(miRNA)是一类新型的起基因转录后调控作用的非编码小RNA分子，在许多肿瘤的发生、发展过程中起关键作用。在所有与人类癌症相关的miRNA中，let-7a最早被发现且能发挥抑癌作用而备受关注。同时黑色素瘤相关抗原

4、家族A（MAGE-A）基因在正常组织中不表达，却在各种肿瘤组织中异常表达。研究表明MAGE-A1家族成员的表达作为癌基因提高了乳腺癌患者的复发风险和死亡率。那么在乳腺癌中，MAGE-A1是否也会受到let-7a抑制。目的：探讨在乳腺癌中，Let-7a能否发挥肿瘤抑制因子作用以调控MAGE-A1基因、继而控制乳腺癌的转移，降低复发风险，也为乳腺癌的治疗提供新的靶点。方法：选取河北医科大学第四医院乳腺中心65例女性乳腺癌患者的肿瘤组织，运用RT-qPCR法检测let-7a和MAGE-A1在转录水平的表达。选取MDA-MB-231和MCF-7两种乳腺癌细

5、胞系，运用RT-qPCR和Westernblot法检测let-7a和MAGE-A1在转录和蛋白水平的表达；运用CCK-8法、细胞划痕法、Transwell法检测let-7a对乳腺癌细胞功能的影响；双荧光素酶报告基因实验检测let-7a对MAGE-A1基因的靶向调控。结果：1.Let-7a与MAGE-A1在乳腺癌组织中的表达及其相互关系let-7a的表达水平在肿瘤>2cm和组织学分级为III级的乳腺癌患者中显着降低（P=0.049和P=0.041）。在其他分组中无显著性差异（P≥0.05）。MAGE-A1的在33例组织中表达，阳性率为50.8％（33

6、/65）；MAGE-A1的表达与否在各亚组中均无统计学意义（P≥0.05）。在MAGE-A1表达阳性的样本中，其表达水平与let-7a呈负相关（P=0.008）。2.Let-7a抑制乳腺癌细胞系的增殖，迁移和侵袭在let-7a模拟物（mimics）转染的细胞中，CCK-8实验、细胞划痕实验和Transwell侵袭实验结果显示细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著降1中文摘要低。相反的在let-7a抑制物（inhibitor）转染的细胞中显著提高。3.Let-7a靶向结合MAGE-A1抑制其在核酸和蛋白水平的表达RT-qPCR和Western印迹实验结果显示

7、let-7a和MAGE-A1在核酸和蛋白水平表达呈负相关。荧光素酶报告基因实验表明let-7a靶向结合了MAGE-A1mRNA3'-UTR的451-457位点。4.Let-7a靶向调控MAGE-A1抑制乳腺癌细胞系的增殖、迁移和侵袭分别将let-7amimicsNC、let-7amimics、let-7amimics和MAGE-A1载体转染到MDA-MB-231细胞系中，CCK-8实验、细胞划痕实验和Transwell侵袭实验结果显示MAGE-A1解救了let-7a对细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论：1.Let-7a在乳腺癌组织中的表达与MAG

8、E-A1的表达呈负相关，且其低表达与乳腺癌的增殖和侵袭有关。2.Let-7a通过靶向调控MAGE-A1可以抑制乳腺癌细胞系