非蛋白氮定量检验

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1、非蛋白氮的定量检验在非蛋白氮定量的检测方法中，比较常用的方法是硫酸铜沉淀法和氨基酸测定法。除此之外，本文根据非蛋白氮的组成结构的不同，采用水解蒸馏法对样品中的非蛋白氮进行检验。　　一、硫酸铜沉淀法　　根据非蛋白氮的化学性质来看，大部分溶于水，一部分在常温下不溶水，但在沸水中溶解。根据此种性质，可以先将样品煮沸，用硫酸铜将样品中的蛋白质沉淀下来，由于非蛋白氮已经溶于水，故可用过滤方法将其与样品中的蛋白质分离。在过滤时，水的温度一定不能太低，否则象双缩脲一类的物质会因为不溶于常温水而不能被过滤掉。用此种方法测定出的蛋白质含量称为样品的真

2、蛋白质。但实际上，此种方法有很大的局限性。如果非蛋白氮不溶于沸水，或者将一般的非蛋白氮微囊化，此种方法测出的结果会与样品中的实际真蛋白有很大的差异。　　二、氨基酸测定法　　为了真正能够判定样品中是否掺有非蛋白氮，需测定样品中的氨基酸含量。无论采用经典的氨基酸自动分析仪分析（柱后衍生），还是采用比较快捷的HPLC分析（往前衍生），将所测定的氨基酸总量相加得到一个总氨基酸数值，然后将此数值乘以6.25为M，和用凯氏定氮法测定的粗蛋白质N相比较，M至少为N的85％（M可能略大于N）。如果低于此数值，则可以判定该样品中掺有非蛋白氮。　　三、

3、水解蒸馏法　　1、原理：非蛋白氮主要包括五类：尿素及其衍生物类、氨态氮类、铵类、肽类及其衍生物、动物粪便及其它废弃物类。如果在原料中掺有氨态氮类、铵类和粪便比较容易判断（可采用硫酸铜沉淀法加镜检），一般很少将肽类及其衍生物掺入其中，剩下比较难鉴别的就是尿素及其衍生物。尿素和尿素衍生物经过强酸或强碱水解为氨盐或氨和其它的物质，在强碱的条件下可以蒸馏出氨气，原料中的蛋白质经过水解成氨基酸盐，氨基酸盐在强碱条件下稳定，从而可将非蛋白氮和真蛋白氮进行分离。　　2、仪器和设备：酒精喷灯，试管和其它常用的仪器。　　3、试剂与溶液：6mol/l的

4、盐酸溶液和其它常用的试剂。　　4、测定方法：本文只列出用酸水解的方法。采集有代表性样品约100g，混匀后用四分法缩分出209左右，将其粉碎，使其全部通过60目样品筛。精确称取0.3000g的样品，置于容积为60ml的试管底部（注意样品勿沾在管壁上），加入30ml6mol/l的盐酸溶液，将试管在距试管口1～2cm处用喷灯加热并封口。将封好的试管置于干燥箱内，于110℃下水解24h。冷却后打开试管，将水解液过滤至100ml容量瓶中，用蒸馏水反复多次冲洗试管和滤纸，然后定容至刻度。用10ml移液管移取10ml样液移入半微量式定氮仪的反应室

5、中，加入20ml1∶1的氢氧化钠溶液蒸馏10min，余下的步骤按照测定粗蛋白的方法进行操作，得出样品所消耗的盐酸的体积为V1（ml）。同时作空白滴定可得消耗的盐酸的体积为V0，设所称样品的质量为M（g）。 　　5、非蛋白氮的粗蛋白质计算公式　　CP(%)＝（V1-V0）×C×O.14×6.25/M 非蛋白氮的概述和检测方法　文章来源：饲料工业　更新时间：2002-11-7点击数：1230曾俊苏俊黎1非蛋白氮的概述非蛋白氮大致可以分为以下几类，①尿素及其衍生物类，如缩二脲、羟甲基尿素等；②氨态氮类，如液氨、氨水等；③铵类，如硫酸铵、氯

6、化铵等；④肽类及其衍生物，包括氨基酸、酰胺、胺等；⑤动物粪便及其它废弃物类。以下是几种常见的非蛋白氮的介绍：1．l双缩脲又称缩二脲，是一种尿素缩合产品，其含氮量在35％上，蛋白质当量为219％。缩二脲难溶于水，一般的定量检验方法为紫红色配位化合物比色法（原理：鱼粉中的双缩脲经抽提后，在酒石酸钠的碱性溶液中与硫酸铜生成紫红色配位化合物，在550nm波长下比色从而测出其含量）。1．2尿素是氮和二氧化碳在高温高压下化合而成。纯尿素的含氮量为47％，折合蛋白当量为293．75％。易潮解，易溶于水，一般的定量检验方法有二种：一种为二甲基氨基苯

7、甲醛显色法；另一种为二嗪衍生物显色法。但以上两种方法只能测定游离性尿素而不能测定其衍生物。1．3尿素甲醛聚合物是由尿素和甲醛聚合而成，其含氮量为38.89％，折合蛋白当量为243．06％。该聚合物难溶于水。1．4硫酸铵俗称肥田粉，其含氮量为20％左右，折合蛋白当量为125％。硫酸铵的工业品一般为白色或微带黄色的结晶，易溶于水，其分子式为（NH4）2SO4。1．5异亚丁基二脲又名二脲异丁烷，简称IBDU，为尿素和异丁醛在催化剂的作用下综合反应生成。IBDU为一种子的白色粉末或颗粒，总含氮量为32．18％，折合蛋白当量为201.13％，

8、吸湿度远低于尿素。以上是比较常见的非蛋白氮物质。随着科技的发展，还会有越来越多的非蛋白氮物质被合成出来，从而使反刍动物所用的非蛋白氮使用广泛，而掺假者很容易将此物质掺入饲料原料中以提高原料的粗蛋白质。2非蛋白氮的检验2．l非蛋白氮的定