《饲料中非蛋白氮》PPT课件

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1、饲料中非蛋白氮的掺假及其检测北京2009-5-16杨曙明博士国家饲料质量监督检验中心中国农科院农业质量标准与检测技术研究所1Instituteofqualitystandardsandtestingtechnologyforagri-food,CAAS.IQSTAP2为什么用非蛋白氮掺假？现有蛋白测定方法的缺陷：重要假设为，所有氮来自于蛋白质，蛋白质含氮量固定。3Thesampleisdigestedtoconverttheproteinnitrogenintoammoniumsulfate,whichistreatedwithanalka

2、li,thusliberatingammonia.Theammoniaisreceivedbyanacidandquantifiedthroughtitrationquantifiedtitration.456UreaammoniumsulfateBiuretMelaminemelamineformaledehyderesin,Urea-farmaldehyderesinMixedcompoundsNext?曾经用于掺假的物质:7适宜于掺假的化合物特性：价低高含氮量没有刺激性气味对动物无毒/或实际无毒不溶于水/酸/碱8无机氮化合物磷酸氢铵，硫

3、酸铵，碳酸铵等其N:17.7%，20.6%，21.2%。价格：300-1000元/吨问题：已被检测9尿素N%：46.7,白色固体，无臭，但有刺激性气味。熔点:132.7–135°C由无机物合成的第一个有机物。10尿素加热所生成的物质ureaheatingtrichloroisocyanuricacidCyanuricacidmeliminebiuretpolymertriuret112分子尿素在加热至其熔点温度时，释放出1个分子氨气，生成1分子缩二脲：2CO(NH2)2→H2N-CO-NH-CO-NH2+NH3↑白色固体，溶于热水，在186–

4、189°C时降解.液态位蓝色，遇蛋白或多肽时变成紫色。12三聚氰酸首次合成于1829年，通过尿素和氰酸热解重组。目前工业合成路线为3个分子尿素热解重组，释放3个分子氨，生成1个分子三聚氰酸。反应温度约为175℃：3H2N-CO-NH2→[C(O)NH]3+3NH3在三聚氰胺粗品结晶过程中，通过水解产生三聚氰酸。三聚氰酸一旦产生将与三聚氰胺结合，产生沉淀。13中间产物与杂质：在脱水的过程中将产生氰酸、缩二脲、缩三脲：H2N-CO-NH2→HNCO+NH3H2N-CO-NH2+HNCO→H2N-CO-NH-CO-NH2H2N-CO-NH-CO-N

5、H2+HNCO→H2N-CO-NH-CO-NH-CO-NH2杂质之一为三聚氰酸一酰胺，判断这是由缩二脲降解重组而形成。当反应温度超过190℃时该杂质显著增加：3H2N-CO-NH-CO-NH2→[C(O)]2(CNH2)(NH)2N+2NH3+H2O当温度在325℃和350℃时，产生少量三聚氰胺。14三聚氰胺目前，工业合成的主要工艺为尿素的热反应：6(NH2)2CO→C3H6N6+6NH3+3CO2反应过程分两个步骤.首先，尿素在吸热反应中降解为氰酸和氨:(NH2)2CO→HCNO+NH3接着，氰酸聚合成三聚氰胺，并放出二氧化碳:6HCNO→

6、C3H6N6+3CO215尿素土法加热处理：为了避免尿素的刺激性气味和容易检测的弊病，掺假者土法对其进行加热处理后刺激性气味明显减少，经检测：真蛋白氮2.56%，总氮41.32%，尿素28.8%，三聚氰酸55%，三聚氰胺4%，未知物？16添加物经常变化添加混合物难以通过感官来辨别掺假者也不知道添加的物质检测所要面临的问题：17如何检测这些掺假目前饲料中非蛋白氮检测有诸多方法，归纳有三类:目标物检测方法扣除分析法蛋白质检测方法18目标物检测:准确、精确、灵敏、适应性强，分析费用昂贵（仪器/耗材），明确掺假物后，才能建立方法。以下以三聚氰胺检测为

7、例说明。19202122231ppb的三聚氰胺、三聚氰酸和其内标物――13C3标记的三聚氰胺和三聚氰酸的色谱图（由上至下依次为：三聚氰酸、13C3标记的三聚氰酸、三聚氰胺、13C3标记的三聚氰胺）2413C3标记的三聚氰胺QED-MS/MS谱图，右图为三聚氰胺QED-MS/MS谱图25谁最高兴？26直接测定蛋白法:不受掺假物影响，方法相对简便、无需大型精密设备，背景影响加大。27EstimationofquantitiesofproteinusingthedyeeosinYA.A.Waheed,andP.D.Gupta(1996)ametho

8、dforestimatingsubmicrogramquantitiesofproteinsusingthedyeeosinY.Theincreaseinsensi