dna与蛋白质技术

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1、选修一DNA和蛋白质技术（一）基础知识扫描一、DNA的粗提取与鉴定1、DNA的溶解性：根据DNA与____________等其他成分在不同浓度的__________溶液中的__________不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA与蛋白质分离。DNA的溶解度最低时的NaCl浓度是_________mol/L。尝试画出DNA的溶解度随NaCl浓度的变化的曲线图。______________________2、DNA_________于酒精，但是细胞中的某些蛋白质________酒精。3、蛋白酶对DNA________（有或无）影响；大多数蛋白质不能忍受_____

2、______的高温，而DNA在_______以上才会变性。洗涤剂能够瓦解_____________，但对DNA没有影响。4、DNA遇____________试剂在______________条件下，会染成_________色。5、两次使用蒸馏水的作用：第一次的作用________________________________；第二次使用的作用__________________________。二、血红蛋白的提取和分离1、本课题中蛋白质分离的方法是__________，是根据__________的大小分离蛋白质的方法。2、缓冲溶液：在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的

3、____________对溶液_________的影响，维持pH基本不变。缓冲溶液通常由___________种___________溶解于水中配制而成。3、电泳：在pH和电场作用下，带电分子会向着_______________________的电极移动。三、实验操作：其中血红蛋白因含有___________而呈现红色。（一）样品处理1、红细胞的洗涤：目的是___________________，以利于后续步骤的分离纯化。将采集的血样分离红细胞的方法是___________________离心，用吸管吸出上层黄色__________，向下层暗红色的红细胞中加入五倍体积的

4、_______________，搅拌、离心，如此反复洗涤三次，直至上清液中_______________，说明红细胞已洗涤干净。这里洗涤次数过少，无法___________________；离心速度过高和时间过长会使___________等一同沉淀，达不到分离的效果。2、血红蛋白的释放：向红细胞中加入_____________，再加40%体积的___________，搅拌。3、分离______________溶液：将搅拌好的混合液以____速_______时间离心，看到溶液分成4层，第1层为无色透明的____________，第2层为______________固体，是

5、____________物质的沉淀层，第3层是______________的水溶液，第4层是____________的暗红色沉淀物。4、透析：将血红蛋白溶液装入透析袋，放入物质的量浓度为________________的__________缓冲液中，透析12h。（二）凝胶色谱操作1、凝胶色谱柱的制作：2、凝胶色谱柱的装填：本实验用的是交联葡聚糖凝胶G—75，G表示__________________________________________，75表示_________________，即__________________________。配成凝胶悬浮液后，缓慢倒

6、入色谱柱内，如果发现有气泡，则__________________。装填完后，立即连接缓冲液洗脱瓶洗脱。3、样品的加入和洗脱：在蛋白质分离过程中，如观察发现红色区带________地移动，说明成功。（三）操作提示：1、色谱柱填料的处理：商品凝胶使用前需直接放在_____________或_____________中膨胀。为了加速膨胀，可以将湿凝胶用沸水浴加热，这种方法不但节约时间，而且可以除去凝胶中可能带有的______________，排除胶粒内的___________。2、凝胶色谱柱的装填：装填时要尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的__________；也不能有气泡，气

7、泡会________________________________，降低分离效果；也不能发生_________________，露出凝胶颗粒的现象。小结：蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理是指_________________________________________________________，粗分离是指__________，纯化是指____________________，纯度鉴定是指_________________________。（二）典型例题1、下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是A．洗涤剂能瓦解细胞膜，