《DNA与蛋白质技术》PPT课件

《《DNA与蛋白质技术》PPT课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、高频考点1.蛋白质的提取和分离。2.PCR技术的基本操作和应用。实验要求1.蛋白质提取的原理和方法。2.PCR技术的操作及原理。第六章　蛋白质和DNA技术1．方法及原理(1)方法：电泳法。(2)原理：①各种蛋白质分子带电性质的差异；②分子本身大小、形状的不同。2．实验操作程序(1)点样：用微量加样器取新制血清，小心加到电泳样品槽的胶面上。(2)电泳：打开并调节稳压稳流电泳仪进行电泳。(3)染色：用质量分数为0.05%的考马斯亮蓝R250染色液对凝胶进行染色。(4)脱色：用体积分数为7%的醋酸溶液脱色。(5)制干胶板：保存液浸泡

2、凝胶板后，放在两层透气玻璃纸中间自然干燥。特别提醒：相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，而相对分子质量较大的蛋白质只能在凝胶外部移动，移动速度快，因此蛋白质分子彼此分离。1.下面是凝胶色谱法分离血红蛋白时样品的加入(图Ⅰ)和洗脱(图Ⅱ)示意图，请据图回答下列问题。(1)在加样示意图中，正确的加样顺序是________。(2)用吸管加样时，应注意正确操作，分别是①________、②________、③________。(3)等样品________时，才加入缓冲液。(4)待____

3、____接近色谱柱底端时，用试管收集流出液每________mL收集一管，连续收集。解析：进行凝胶色谱操作加样时，加样前，打开色谱柱下端的流出口，使核内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到与凝胶面平齐，用吸管小心地将1mL透析后的样品加到色谱柱的顶端，注意不可破坏凝胶面。吸管应贴着管壁加样，待样品完全进入凝胶层后才可关闭下端出口，加入缓冲液，待红色蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每次5mL收集一管，连续收集。答案：(1)④→①→②→③(2)不要触及破坏凝胶面　贴着管壁加样　使吸管管口沿管壁环绕移动(3)完全进入凝胶层(4)红色

4、的蛋白质51．细胞内DNA复制与PCR技术的比较细胞内DNA复制PCR不同点解旋在解旋酶作用下边解旋边复制95℃高温解旋，双链完全分开酶DNA解旋酶、DNA聚合酶耐高温的DNA聚合酶引物RNA人工合成的DNA单链温度体内温和条件高温相同点①需提供DNA复制的模板；②四种脱氧核糖核苷酸作原料；③子链延伸的方向都是从5′端到3′端2.PCR技术反应过程中控制不同温度的意义(1)95℃变性，双链DNA解旋为单链；(2)55℃复性，引物与两条单链DNA结合；(3)72℃延伸，耐高温的DNA聚合酶有最大活性，使DNA新链由5′端向3′端

5、延伸。2.多聚酶链式反应（PCR）是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般经历30多次下述循环：95℃条件下使模板DNA变性、解链→55℃条件下复性(引物与DNA模板链结合)→72℃条件下引物链延伸(形成新的脱氧核苷酸链)。下列有关PCR过程的叙述，不正确的是()A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成的C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、4种核糖核苷酸D．PCR与细胞内DNA复制相比，其所需要酶的最适温度较高解析：PC

6、R一般要经历30多次循环，每次循环可以分为变性、复性和延伸三步。从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合，进行DNA的延伸。DNA变性(90℃～95℃)：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA。复性(55℃～60℃)：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。延伸(70℃～75℃)：在Taq酶(在72℃左右活性最高)的作用下，以dNTP(三磷酸脱氧核糖核苷酸的缩写)为原料，从引物的5′端向3′端延伸，合成与模板链互补的DNA链。答案：C【例1】(2

7、009·广东高考)(1)商品化植酸酶主要来自微生物。在产酶菌株筛选过程中，常在基本培养基中添加不溶于水的植酸钙制成固体平板，植酸钙被植酸酶分解后可在平板上产生________，可根据其大小选择目的菌株，所得菌株需要进一步测定植酸酶活性。活性测定可以植酸钠作为底物，活性可用一定条件下单位时间的________表示。(2)利用上述所得菌株制备植酸酶的流程如下图：Ⅰ中的主要成分为________；Ⅱ中包含植酸酶等多种蛋白质。请写出一种纯化得到植酸酶的方法及其依据。___________________________________

8、_____________________________________。(3)为构建基因工程菌，可用PCR等技术从上述菌株中克隆植酸酶基因。PCR反应包括多次循环。每次循环包括三步：________________________。反应过程中打开模板DNA双链的方法是__