dna和蛋白质技术wang

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1、DNA和蛋白质技术知识目标1、通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取，了解DNA的物理化学性质。2、理解DNA粗提取与鉴定的原理。能力目标掌握DNA粗提取及鉴定方法，能利用DNA的性质进行实验设计和操作。态度观念目标通过对DNA的粗提取的实验过程的设计及操作，锻炼科学的思维方法，培养实事求是的科学态度。1、提取生物大分子的基本思路选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子2、提取DNA的基本思路利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分一.提取DNA

2、的方法DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反溶解度NaCl浓度0.14mol/L0一.提取DNA的方法1.在什么浓度下，DNA的溶解度最小？DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？2.如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？当氯化钠的物质的量浓度为2mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为0．14mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出在NaCl溶液浓度低于0

3、.14mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低在0.14mol/L时，DNA溶解度最小当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大二.实验设计（一）实验材料的选取1、材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中选取2～3种实验材料）2、原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤

4、液即可（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液1、动物细胞讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？二.实验设计蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜.2、植物细胞讨论：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解②实例：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗

5、涤剂和食盐，进行从分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液二.实验设计二.实验设计答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？二.实验设计（三）去除滤液中的杂质为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分?答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质讨论：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质?答：用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；

6、用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质二.实验设计（四）DNA的析出与鉴定DNA的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒精溶液（体积分数为95％），静置2－3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA。1、DNA的析出DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂2、DNA的鉴定三.实验案例案例：以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取①提取鸡血细胞的细胞核物质②溶解细胞核内的DNA③析出含DNA的粘稠物④滤

7、取含DNA的粘稠物⑤将DNA的粘稠物再溶解⑥过滤含有DNA的氯化钠溶液⑦提取含杂质较少的DNA⑧DNA的鉴定操作步骤①提取鸡血细胞的细胞核物质将制备好的鸡血细胞液5mL～10mL，注入到50mL烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水20mL，同时用玻璃棒充分搅拌5min，使血细胞加速破裂。然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至500mL。取其滤液。讨论1.为什么要加入蒸馏水？加入蒸馏水后细胞会有什么变化？2.用玻璃棒搅拌有什么意义？3.滤去的是什么物质？得到的是什么？答：让细胞内浓度大于周围溶液的浓度，细胞会吸水以至涨破答：用玻璃

8、棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破裂。注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能太快太猛，防止打碎DNA答：过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质；得到的是与蛋白质等物质结合在一起的DNA②溶解细胞核内的DNA将氯化钠的物质的量浓度为2mol/L的溶液40mL加入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min，使其混合均匀，这时DNA溶解在溶液中。然