《DNA和蛋白质技术重点例析》

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1、《DNA和蛋白质技术重点例析》张建尚/江苏一、DNA的粗提取与鉴定1.基木原理DNA在0.ldmol/LNaCIDNA不溶DNA被二苯胺溶液中溶解度最低粗分离于酒精I进一步提纯溶液染成蓝色鉴定DNA材料的选取：选川DNA含量相对较高的生物组织。V破碎細胞"2.操作过程『动物：鸡血细胞小加蒸懈水，用玻璃棒搅拌，用纱布过滤，收集滤液。•植物：切碎的植物屮加入洗涤剂和食盐，进行搅拌和研磨，过滤，收集滤液。去除杂质：DNA析岀：利用DNA在不同浓度的NaCl溶液小溶解度的不同，通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质。将处理示的溶液

2、过滤，加入与滤液体积和等的、冷却的体积分数为95%的酒精溶液。DNA的鉴定：在溶冇DNA的溶液屮加入二苯胺试剂，沸水屮加热5min,溶液变成蓝色。特别提酥:：①木实验不能用哺乳动物成熟红细胞作实验材料，原因是哺乳动物成熟红细胞无细胞核。②实验中两次使用蒸憎水，第一次的目的是使成熟的鸡血细胞涨破释放出DNA,第二次的日的是稀释NaCl溶液，使DNA从溶液中析出。③二苯胺试剂要现配现用，否则二苯胺会变成浅蓝色，影响鉴定效果。【例1】下图为“DNA粗提取和鉴定”实验的札I关操作，请仔细观察并分析①〜④操作的目的错误的是（）2

3、mol/LN&CI溶液A.①是使鸡血细胞吸水涨破释放出核物质B.②是析出DNA,去除不溶于酒精的杂质C.③是使DNA溶解在2mol/LNaCl溶液中D.④是稀释NaCl溶液使其浓度接近0.14mol・L"1,去除溶于低浓度NaCl溶液的杂质【解析】①是让鸡血细胞在蒸馆水中吸水涨破，以释放出含有DNA的核物质，A项疋确；DNA不溶于酒精，而某些蛋口质筹杂质溶于酒精，依次可以除去溶于酒精的杂质，B项错误；DNA能够溶解在2mol/LNaCl溶液小，C项止确；©NaCl溶液经蒸憎水稀释使其浓度接近0.14mol•L~l,DN

4、A析出,此时可以去除溶于低浓度NaCl溶液的杂质,D项正确。【答案】B二、PCR技术的基本操作和应用1.PCR技术一原理一利用热变性原理使DNA双链间的红键断裂一原料一四种脱氧核昔酸PCR技术一一原则一碱基互补配对原则夂科一除模板、原料、酶以外，PCR至少需要液体—加+—环境、PCR仪调控温度和缓冲液三个条件—装置一PCR仪1.PCR反应过程(1)变性：当温度上升到90°C以上时，双链DNA解旋为单链。(2)复性：温度下降到55°C左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。⑶延伸：温度上升到72°C左右时，

5、溶液中的四种脱氧核卄酸(A、T、C、G)在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。2.细胞内DNA复制与休外DNA扩增(PCR)的比较细胞内DNA复制体外DNA扩增(PCR)解旋在解旋酶作用下边解旋边复制80〜100°C高温解旋，双链完全分开酶DNA解旋酚、DNA聚合酶7zy^DNA聚合酶引物RNADNA、RNA温度体内温和条件U温能量ATP不加循环次数生物体H身控制30多次相同占提供DNA模板；4种脱氧核仟酸为原料；子链延伸的方向都是从5,端到3'端；都需要酶催化特別提醒：①PCR反应过程中的能量

6、來自原料。②PCR反应需耍引物，引物的人小要适宜，引物本身不应存在互补序列，引物之间也不应存在互补序列。③在微量离心管中添加各种试剂时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头必须更换，确保实验的准确性。①离心管的盖子一定要盖严，防止实验中脱落或液体外溢。②离心10s的H的是使反应液集中在离心管底部，提高反应效果。【例2］多聚酶链式反应(PCR技术)是体外酶促合成特杲DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火及适温延伸等儿步反应组成-个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，其简要过程如图所示。下列关于PCR技术叙述错误的是

7、()循环重复A.PCR技术是在实验室屮以少量DNA制备人量DNA的技术B.反应中新合成的DNA又可以作为下一轮反应的模板C.PCR技术小以核糖核井酸为原料，以指数方式扩增D.应用PCR技术与探针杂交技术可以检测基因突变【解析】PCR技术是人工合成DNA的方法，原料是脱氧核苛酸而不是核糖核昔酸。【答案】C三、血红蛋白的提取和分离1.方法及原理方法原理凝胶色谱法根据相对分子质量的大小分离蛋口质电泳法各种分子带电性质的差异以及分子本身大小、形状的不同2.血红蛋白的提取和分离过程特别提醒：①红细胞洗涤的目的是去除杂蛋口，所用的

8、溶液是牛理盐水。②粗分离是用透析法去除样品中的分子量较小的杂质。③纯化是用凝胶色谱法分离和对分子质量不同蛋白质。④纯度鉴定利用的是电泳法。【例3】卜•图是用除去DNA的滤液进行血红蛋白的提取和分离实验的装置，卜•列有关叙述错误的是()甲红褐色Fe(OH)3胶体丙A.用图甲装置对滤液进行处理，其H的是去除相对分子质量较大的杂质B.图