双黄连颗粒中绿原酸含量的hplc测定

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1、双黄连颗粒中绿原酸含量的HPLC测定：张洪涛,蔡俊安,郭鑫慧【摘要】目的采用高效液相色谱法测定双黄连颗粒中绿原酸的含量。方法用外标一点法,DiamonsilODS1C18色谱柱,甲醇-水-冰醋酸(15∶85∶1)为流动相,流速为1.0mL/min,λ＝324nm。结果绿原酸在0.060～1.210μg范围内呈良好线性,回归方程为Y＝105427X＋586.43,r2＝0.9995,平均加样回收率为99.3%,RSD＝0.82%(n＝6)。结论本方法简便、准确,专属性强,测定结果重复性好,为双黄连颗粒中绿原酸的定量

2、分析提供了科学有效的方法。【关键词】双黄连颗粒；绿原酸；高效液相色谱法；含量测定　　Abstract：ObjectiveToestablishthemethodfordeteminingthecontentofchlorogenicacidinShuanghuanglianKelibyHPLC.MethodsUsingDiamonsilODS1C18column,ethanol-obilephase,detectionandfloL/min.ResultsThecalibrationcurveethodple,a

3、ccurateandproper,andthereduplicationoftheresultethodofchlorogenicacidinShuanghuanglianKeli.　　Keyination　　　　双黄连颗粒收载于2005年版《中华人民共和国药典》(一部)[1],处方由金银花、黄芩、连翘组成,功能疏风解表、清热解毒,用于外感风热所致的感冒。金银花为方中君药。原标准中只收载了黄芩的含量测定方法,没有君药金银花的成分含量测定方法,因此,不能有效和全面地控制药品质量。为了更好地控制双黄连颗粒的质量,提高

4、双黄连颗粒的质量标准,我们参照2005年版《中华人民共和国药典》(一部)中收载的双黄连片,采用高效液相色谱(HPLC)法对金银花的主要成分绿原酸进行了含量测定,并进行了方法学研究。现报道如下。　　1仪器与试药　　高效液相色谱仪：SPD-10A日本岛津；紫外分光仪：上海康化生化仪器制造厂；超声波清洗器：SK3200H上海科导超声仪器有限公司。　　绿原酸对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号110753-200413,供含量测定用)；双黄连颗粒由河南百年康鑫药业有限公司提供(批号20081101、20081102、

5、20081103)。其他试剂均为分析纯。　　2方法与结果　　2.1色谱条件　　以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以甲醇-水-冰醋酸(15∶85∶1)为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长为324nm。理论塔板数按绿原酸峰计算应不低于6000[1]。　　2.2溶液的制备　　2.2.1对照品溶液的制备取绿原酸对照品适量,精密称定,置于棕色量瓶中,加50%甲醇制成每1mL含60μL的溶液,即得对照品溶液。　　2.2.2供试品溶液的制备取装量差异项下的本品,研细,取约0.4g,精密称定,置于50mL的量瓶中,加50%

6、甲醇适量,超声处理(功率135in。放置至室温,加50%甲醇至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液2mL,置10mL量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得供试品溶液。　　2.2.3阴性样品的测试取缺金银花的样品,按供试品制备方法制备阴性样品后测定,在绿原酸相应位置无峰出现,说明阴性样品的其他成分无干扰。色谱图见图1。图1双黄连颗粒HPLC图谱注：A.对照品；B.供试品；C.阴性样品　　2.4精密度试验　　取同一对照品溶液,重复进样6次,每次进样10μL,测定绿原酸峰面积,结果RSD＝0.14%,表明精

7、密度良好。　　2.5重复性试验　　取同一批号(批号20081101)供试品,按供试品溶液制备方法制备5份供试液,依法测定每份样品中绿原酸的含量。结果RSD＝1.18%,表明本法重复性良好。　　2.6稳定性试验　　取同一批号(批号20081101)供试品,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,分别在0、2、4、6、8h测定峰面积,RSD＝0.76%(n＝5)。表明制备的供试品溶液在8h内稳定。　　2.7加样回收率试验　　采用加样回收法。精密称取已知含量的同一批样品(批号20081101,含量为5.217mg/g)

8、0.2g,置50mL量瓶中,分别精密加入绿原酸对照品溶液(0.375mg/mL)各3mL,蒸干,按“2.2.2”项下方法制备供试液,照上述色谱条件测定。分别进样10μL,测定绿原酸峰面积并计算绿原酸含量(见表1)表1加样回收率试验结果,结果平均回收率为99.3%,RSD＝0.82%(n＝6)。　　2.8样品测定　　对3批中试产品进行测定,结果见表2。表2样品测定结果　　3