【医学ppt课件大全】 rna干扰 rna interference，rnai

《【医学ppt课件大全】 rna干扰 rna interference，rnai》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、RNA干扰RNAinterference，RNAiContents概述1发现过程2机制和特点3应用4概述RNA干扰（RNAinterference,RNAi）是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-strandedRNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。概述近几年来RNAi研究取得了突破性进展，被《Science》杂志评为2001年的十大科学进展之一，并名列2002年十大科学进展之首。2006年10月2日瑞典卡罗林斯卡医学院宣布，将2006年诺贝尔生理学，医学奖授予两名美国科学家安德鲁·菲尔和克雷格·梅洛，以表彰他们发现了RNA干扰现象。发现过程共

2、抑制现象的发现ＲＮＡｉ研究的早期线索早在20年前,来自于美国和荷兰的两个转基因植物实验组,Rich-orgensen和同事,在对矮牵牛(petunias)进行的研究中有个奇怪的发现:他们设想将更多的色素基因注入矮脚牵牛植物体中，试图加深花朵的紫颜色，而结果出其预料，转基因的植株不仅没有新基因表达，反而使原有的色素基因也受到了抑制。图示发现过程发现过程Jorgensen将这种现象命名为共抑制(cosuppression)因为导入的基因和其相似的内源基因同时都被抑制。发现过程Quelling现象并非只有植物学家才注意到了这种意外的现象。意大利的Cogoni等,将外源类胡萝卜素基因导入链孢霉

3、(Neurosporacrassa),结果转化细胞中内源性的类胡萝卜素基因也受到了抑制。而在真菌转基因实验中这种共抑制现象被称“quelling”现象。发现过程RNAi的发现线虫中首次发现了RNAi：95年康乃尔大学的研究人员Guo和kemphues在秀丽线虫(C.elegans)中用反义RNA阻止一些基因的表达，给对照组用正义RNA不但不增加该基因的表达，反而产生与反义RNA同样的结果——特异性阻断该基因的表达，这个奇怪的现象直到3年后1998才被解开。Fire等发现将dsRNA注入秀丽线虫可显著抑制特定基因的表达，并证明了Guo和kemphues所发现的正义RNA的基因压制作用其实

4、是转录时污染微量dsRNA所造成的。发现过程将制备的RNA高度纯化后发现，正义RNA无基因抑制作用，反义RNA的基因抑制作用也很微弱，而用纯化后的dsRNA注入线虫，却能高效、特异地阻断相应基因的表达。实验证明双链RNA抑制基因的表达的效率比纯化后的反义RNA至少高几个数量，他们称此现象为dsRNA介导的RNA干扰（RNAi）。图示Effectsofmex-3RNAinterferenceonlevelsoftheendogenousmRNA.NomarskiDICmicrographsshowinsituhybridizationof4-cellstageembryos.(A)Neg

5、ativecontrolshowinglackofstainingintheabsenceofthehybridizationprobe.(B)Embryofromuninjectedparentshowingnormalpatternofendogenousmex-3RNA(purplestaining).(C)Embryofromparentinjectedwithpurifiedmex-3antisenseRNA.Theseembryos(andtheparentanimals)retainmex-3mRNA,althoughlevelsmaybesomewhatlessthan

6、wildtype.(D)Late4-cellstageembryofromaparentinjectedwithdsRNAcorrespondingtomex-3;nomex-3RNAisdetected.(TemplatesusedforinterferingRNAandinsituprobeswerelargelynon-overlapping.)发现过程RNAi现象的普遍性随后陆续发现RNAi也存在于水稻、烟草、果蝇、小鼠及人等几乎所有的真核生物中。RNAi能高效特异的阻断基因的表达，在线虫，果蝇体内，RNAi能达到基因敲除的效果。RNAi的机制目前普遍认为，共抑制、基因压制和R

7、NAi很可能具有相同的分子机制，都是通过dsRNA的介导而特异地降解靶mRNA,抑制相应基因的表达。现已初步阐明dsRNA介导的同源性靶mRNA降解过程主要分为两步。RNAi的机制第一步（起始阶段）是较长dsRNA在ATP参与下被RNaseⅢ样的特异核酸酶切割加工成21~23nt的由正义和反义链组成的小干扰RNA（smallinterferingRNA，siRNA）。RNAi的机制第二步（效应阶段）是siRNA在ATP参与下被RNA解旋酶解旋成