膀胱移行细胞癌p┐gp170表达与细胞凋亡的关系

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1、膀胱移行细胞癌P┐gp170表达与细胞凋亡的关系关键词:膀胱肿瘤;P-糖蛋白;脱噬作用;免疫组织化学摘要:目的探讨原发性膀胱移行细胞癌P-糖蛋白（P-gp170）表达与细胞凋亡的关系.方法用免疫组化SP方法和凋亡细胞原位标记（TUNEL）检测了40例膀胱移行细胞癌P-gp170表达和细胞凋亡，并应用图像分析系统定量分析其凋亡指数（AI）.结果40例膀胱移行细胞癌P-gp170表达率为48%，组织学分级之间无显著性差异（P>0.05）;AI随组织学分级增高而增高，各分级之间有显著性差异（P<0.05）;AI在膀胱移行细胞癌P

2、-gp170阳性表达组明显低于P-gp170阴性表达组，有显著性差异（P<0.01）.结论原发性膀胱移行细胞癌P-gp170高表达可能抑制细胞凋亡过程致AI降低.　　Keys;P-glycoprotein;apoptosis;immunohistochemistry　　Abstract:AIMTostudytherelationshipbeta-rybladdertransitionalcellcarcinoma.METHODSIn40casesarybladdertransitionalcellcarcinoma，munohi

3、s-tochemistry，anddetectedtheapoptosisbyinsituapoptotic　celllabelingmethodofTUNEL，thencalculatedtheApopto-sisIndex（AI）byimagesanalysissystem.RESULTSMeanexpressionrateofP-gp170in40casesofbladdertransitionalcellcarcinomaorsors（P<0.05）.AIintheP-gp170positivebladdertransi

4、tionalcellcarcinomagrouparybladdertransitionalcellcarcinomamayinhibittheprocessofcellapoptosis.　　0引言　　多药耐药性（MDR）是肿瘤化疗失败的重要原因，肿瘤细胞多药耐药基因（MDR-1）的扩增及其编码产物P-gp170的高表达是介导肿瘤MDR的主要机制［1］.大量研究表明，P-gp170是一种能量依赖性“药泵”，可耗能将细胞内的药物泵出胞外，使胞内药物减少而无法构成对肿瘤细胞的有效杀伤［2］.细胞凋亡（apoptosis）是由基因调控的细

5、胞主动死亡形式，它通过消除异常细胞达到内环境的稳定，细胞凋亡也是肿瘤生长的一个重要调节因素［3，4］.显然，肿瘤细胞的凋亡和MDR都与维持细胞自身稳定有关，两者之间有何关系?这个问题近年来逐渐受到关注［5-9］.尽管在膀胱癌有关凋亡及MDR的研究渐有报道［2，10］，但关于两者之间关系的研究很少见［10］，为此，我们观察了40例原发性膀胱移行细胞癌P-gp170的表达并检测了其癌细胞凋亡指数（apoptosisindex，AI），探讨膀胱移行细胞癌MDR与凋亡之间的关系.　　1材料和方法　　1.1材料取西京医院1998-01/2000

6、-12活检和手术切除的原发性膀胱移行细胞癌标本40（男28，女12）例，患者平均年龄48.2（28～70）岁.病理检查前均未接受过放疗和化疗.所有标本均经40g・L-1中性多聚甲醛固定，石蜡包埋，4μm连续切片，分别进行HE染色和P-gp170免疫组化染色及凋亡细胞原位标记（TUNEL法）.P-gp170mAbSP检测试剂盒及DAB显色剂均为美国Zymed公司产品（购自北京中山生物技术有限公司）.凋亡检测采用的TUNEL试剂盒（MK1020）为武汉博士德公司产品.　　1.2方法诊断标准参照Ab稀释度为1∶40，按说明书操

7、作.以正常血清代替一抗为阴性对照，以PBS代替一抗为空白对照，以表达P-gp170的正常肾组织阳性切片为阳性对照.TUNEL标记染色按试剂盒说明书操作，反应液中不加TdT酶作为阴性对照，肿瘤中的坏死区域作为自身阳性对照.　　1.3结果判断①P-gp170:凡肿瘤细胞膜和/或质呈棕黄色染色者为阳性细胞.阳性细胞小于20%为（-）;阳性细胞大于20%为（+）.②TUNEL:细胞核出现棕黄色染色者为阳性细胞，同时对照HE切片，可见细胞核缩小变圆、核致密和凋亡小体出现.在显微镜400倍视野下，用HPIAS-1000高清晰度多媒体彩色病理图文分

8、析仪进行计量分析，分别测出每个视屏中阳性细胞数和癌细胞总数.AI为阳性细胞总数与癌细胞总数之比的百分率.选择非坏死区、癌细胞分布均匀区域进行测定，并结合HE染色排除坏死细胞及其他色素沉着.每例切片随机观察5个视屏进行计数