芒果苷对白血病hl

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1、芒果苷对白血病HL彭志刚，黄潇，王晓雪，刘振芳，杨杰，罗军【摘要】目的研究芒果苷对人髓系白血病HL-60细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法用MTT法观察芒果苷对HL-60细胞增殖的影响;应用细胞形态学、DNA凝胶电泳和流式细胞术等观察芒果苷对HL-60细胞的诱导凋亡作用;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测芒果苷作用前后Bcl-2、survivin基因mRNA表达水平的变化。结果芒果苷能明显抑制HL-60细胞的增殖，并能有效诱导HL-60细胞凋亡，随着药物浓度增加和作用时间延长.freelRNA表达随着药物浓度增加和作用时

2、间的延长而逐渐减弱。结论芒果苷能有效抑制HL-60细胞增殖，诱导其凋亡;Bcl-2、survivin可能参与了芒果苷抑制HL-60细胞增殖、诱导凋亡的过程。【关键词】芒果苷;白血病HL-60细胞;增殖抑制;细胞凋亡Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectofMangiferinonproliferationandapoptorisofhumanacutemyeloidleukemiacelllineHL-60anditsmechanism.MethodsHL-60cellorphology,DN

3、Agelelectrophoresisandfloetry.Theexpressionofbcl-2，survivingenearkablyinhibitedHL-60cellsproliferationinatime-concentrationmanner.ApoptosisinHL-60cellscouldbeefficientlyinducedbyMangiferininatime-concentrationmanner.TheresultsofRT-PCRshoent.ConclusionMangiferincaneffici

4、entlyinducethegroaybeinvolvedinthisprocess.Keyangiferin)是一种四羟基吡酮的碳糖苷，属双苯吡酮类黄酮类化合物，在多种植物中存在。现代药理和临床研究表明，芒果苷具有抗氧化、抗细菌、抗病毒、免疫调节、抗肿瘤等多方面的生理活性和药理作用，特别是其抗肿瘤的作用越来越受到人们重视1。已有实验证明，芒果苷对肿瘤细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用2。本实验以人急性髓细胞白血病HL-60细胞为研究对象，观察芒果苷对HL-60细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用，为寻找研发新的白血病治疗药物提供初步的实验依据

5、。1材料1.1药物芒果苷由广西民族医院临床医学研究所中心实验室黄华博士惠赠。用2%NaHCO3配置成10mmol/L，分装，-20℃冻存。1.2试剂IMDM培养基(美国Sigma公司)，MTT(Sigma公司)，细胞凋亡流式检测试剂盒(BD公司产品)。逆转录酶MMLV、Taq酶、dNTP、oligo均购自Promega公司。1.3细胞培养人急性髓细胞白血病细胞株(HL-60细胞株)购自上海生命科学研究院细胞库，细胞悬浮生长于含20%胎牛血清的IMDM培养液中，于37℃、5%CO2、饱和湿度的温箱中培养。2~3d换1次培养液。采用台盼蓝

6、染色计数法测定细胞存活率。取对数生长期的细胞用于以下各项实验。2方法2.1分组取对数生长期细胞用于实验。细胞初始浓度为5×104/ml，设空白对照组，实验组(20，40，80，160，200，250μmol/L芒果苷)分别作用HL-60细胞24，48，72和96h。2.1.1细胞毒性实验(MTT法)每组设4个复孔，培养24，48，72，96h后，加入MTT10μl，静置4h后离心弃去上清液，每孔加入DMSO150μl，待结晶溶解。10min后，用BIO-RAD型450酶联免疫检测仪于490波长处测OD值，计算抑制率，实验重复3次。抑制

7、率(%)=(对照组A490-实验组A490)/对照组A490×100%2.1.2光镜和透射电镜下观察细胞形态分别收集、洗涤实验组和对照组的细胞，取部分细胞悬液均匀涂布于载玻片上、晾干。MLV200U,按随机六聚脱氧核苷酸引物合成法合成cDNA。Bcl-2、Survivin基因扩增的引物及内对照β-actin引物均由大连宝生物公司合成,β-actin和Bcl-2引物序列设计参照文献3，Survivin引物设计分别参照文献4，β-actin正义链：5′-GTGGGGCGCCCCAGCACCA-3′，反义链：5′-CTCCTTAATGTCA

8、CGCACGATTC-3′扩增产物长度为548bp;Bcl-2正义链：5′-CGACGACTTCTCCCGCCGCTACCGC-3′，反义链：5′-CCGCATGCTGGGGCCGTACAGTTCC-3′，扩增产物为31