细胞基因治疗技术和应用

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1、细胞基因治疗技术及应用·228.国外医学翰血及血液学分册1996年第19卷第4期细胞基因治疗技术及应用兰州军区总医院血液科(兰州，730050)王存邦综述达万明审校摘要随重组DNA技术的飞速发展，细胞墓因治疗技术研究已取得了一系列可喜成果.本文从病毒载体的构建、靶细胞的选择、基因转移技术及临床应用方面，概述了墓因治疗的墓础研究概况、临床应用情况及发展前景。关锐词逆转录病毒载体造血干细胞基因治疗基因转移由于分子生物学的飞速发展，人类已经能够在基因水平上诊断疾病。近10余年来，分子基因技术已愈来愈多地用来将外源基因转入喃乳类细胞，以纠正或增加某些细胞的功能，

2、其最终目的是用来进行人类疾病治疗。基因治疗即转移一个有功能的外源基因进入适当的体细胞，且应有适当的基因表达，能纠正或逆转疾病过程.基因治疗技术包括病毒载体的构建，靶细胞的选择，将目的基因(治疗基因)转入靶细胞内且得到高表达。由于逆转录病毒载体的应用，基因转移的效率得以提高，且能稳定表达，没有直接对靶细胞的损害，使基因治疗已成为现实‘，’。一、逆转录病毒载体及构建自开展基因治疗研究以来，逆转录病毒载体是应用最多的病毒载体.所有的逆转录病毒均具有相似的基因结构，以MOMLV(莫洛尼氏小鼠白血病病毒)为例，其全部基因编码于一条单链RNA上，病毒进入细胞后在逆转

3、录酶作用下逆转录成双链DNA，并以前病毒的形式整合进入宿主细胞基因组中.逆转录病毒基因组由反式作用序列和顺式作用序列组成。反式作用序列包括:①GAG，编码病毒颖粒核心结构的蛋白质;②POL，编码逆转录酶;OENV,编码外壳蛋白。顺式作用序列包括:位于病毒基因组的3'端和5'端的长末端重复序列(LTR)，可指导病毒结合入宿主细胞基因组。5'端LTR也参与结合入基因副本的开始复制。在5'LTR和GAG之间有一“平”区域，即包装信号，用来包装复制的病毒成为完整的『病毒颗粒〔2，。构建重组逆转录病毒载体的主要原则是:保留顺式作用序列，用目的基因置换反式作用序列。

4、构建的重组逆转录病毒载体由I于编码病毒结构蛋白的基因被日的基因置换，因此本身不能包装，而需要包装细胞提供反式作川序列，才能产生感染性病毒颗粒〔‘，。包装细胞系主要由小鼠成纤维细胞改造而成〔幻。此细胞系具有选择性地补足缺陷病毒功能的能力;并通过以下改造而成:①删除病毒基因组中的包装信号“IV9，使其不能作为一个载体;②介导改造过的病毒进入包装细胞成为质粒，结果包装细胞获得了产生逆转录病毒结构蛋白的能力，但它缺乏包装信号。当逆转录病毒载体转染包装细胞时，包装信号得以恢复，有用的病毒组分被装配成病毒颗粒.此颗粒携带有治疗墓因，能够感染靶细胞，但无扩散能力。逆转

5、录病毒载体本身也存在一些缺点〔‘，:①插入基因的大小受限(7-8k6),(②有效的基因结合依赖于活跃的DNA复制;③靶细胞上需要有病毒受体存在;④有在靶细胞中失活的可能;⑤偶有可能结合进宿主细胞DNA中，引起细胞功能发生无法预测的变化;⑥有不希望见到的病毒复制的危险。·228.国外医学翰血及血液学分册1996年第19卷第4期细胞基因治疗技术及应用兰州军区总医院血液科(兰州，730050)王存邦综述达万明审校摘要随重组DNA技术的飞速发展，细胞墓因治疗技术研究已取得了一系列可喜成果.本文从病毒载体的构建、靶细胞的选择、基因转移技术及临床应用方面，概述了墓因

6、治疗的墓础研究概况、临床应用情况及发展前景。关锐词逆转录病毒载体造血干细胞基因治疗基因转移由于分子生物学的飞速发展，人类已经能够在基因水平上诊断疾病。近10余年来，分子基因技术已愈来愈多地用来将外源基因转入喃乳类细胞，以纠正或增加某些细胞的功能，其最终目的是用来进行人类疾病治疗。基因治疗即转移一个有功能的外源基因进入适当的体细胞，且应有适当的基因表达，能纠正或逆转疾病过程.基因治疗技术包括病毒载体的构建，靶细胞的选择，将目的基因(治疗基因)转入靶细胞内且得到高表达。由于逆转录病毒载体的应用，基因转移的效率得以提高，且能稳定表达，没有直接对靶细胞的损害，使

7、基因治疗已成为现实‘，’。一、逆转录病毒载体及构建自开展基因治疗研究以来，逆转录病毒载体是应用最多的病毒载体.所有的逆转录病毒均具有相似的基因结构，以MOMLV(莫洛尼氏小鼠白血病病毒)为例，其全部基因编码于一条单链RNA上，病毒进入细胞后在逆转录酶作用下逆转录成双链DNA，并以前病毒的形式整合进入宿主细胞基因组中.逆转录病毒基因组由反式作用序列和顺式作用序列组成。反式作用序列包括:①GAG，编码病毒颖粒核心结构的蛋白质;②POL，编码逆转录酶;OENV,编码外壳蛋白。顺式作用序列包括:位于病毒基因组的3'端和5'端的长末端重复序列(LTR)，可指导病毒

8、结合入宿主细胞基因组。5'端LTR也参与结合入基因副本的开始复制。在5'LTR和