外周血染色体制片成功方法的探讨

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1、外周血染色体制片成功方法的探讨永州市妇幼保健院湖南永州425000【摘要】目的探讨外周染色体制片成功的方法。方法将2014年3月至2016年3月来我院进行遗传咨询以及治疗的500名人员作为研宄的对象，向研究对象抽取4ml的静脉血，使用RPMI1640的培养基进行培养，放置在培养箱内进行观察，对影响细胞培养的因素进行分析。结果在500个外周血染色体制片中的培养中成功了485例，15例在经过相应的补救措施后也获得了成功。在此次研究中都取得了良好的培养效果。结论在外周染色体制片中如果注意一些相关的方式可以提供成功率，确保外周血染色体制片的成功。【关键词】外周血染色体制片；成功的方法；探讨在人类的

2、基因遗传中，染色体扮演着重要的角色。染色体是细胞核的重要组成部分，也是包含着遗传因素，是人类基因的载体［1］。在关于关于染色体的研究对人类的生育有着重要的意义，可以切实提高人口的素质。外周血染色体制片由于用血少易操作等优点被使用，但也存在着较大的问题，导致失败率高。为了提供外周血染色体制片的成功率，笔者进行了这一方面的探宄。现报告如下:1.资料与方法1.1临床资料将2014年3月至2016年3月来我院进行遗传咨询以及治疗的500名患者作为研究的对象，向研究对象抽取4ml的静脉血，使用RPMI1640的培养基进行培养，放置在培养箱内进行观察［2］。细胞培养的环境应该保持与体内的环境一致，首先

3、应该是无菌无污染的环境，不影响细胞的培养；其次，温度需要保持在.一定的温度，细胞培的最佳温度应该为36.5±0.5°C，一旦偏离这一温度，细胞的生长会受到影响；其三，细胞的培养需要相应的气体，主要是氧气以及二氧化碳，这是细胞培养不可缺少的。1.2方法1.2.1采集血液样本使用一次性注射器先采用0.5ml的肝素稀释液作为抗凝剂，在采取研究对象的血液样本，先用碘酒对研究对象的皮肤进行消毒，再用专门的橡皮管扎紧静脉冋流的上端，用注射器抽取静脉血4ml。之后再将抽取的血液与肝素充分摇匀，防止血液凝固，而影响细胞的培养。1.2.2接种以及培养培养基是影响培养的关键的因素，本此研究所采用

4、的培养基为RPMI1640(5mL)。在无污染的操作环境下，先需要对所用的容器进行消毒后，将采取的外周血的血液样本接种到相砬的培养基中，再轻轻摇晃，使之混合均匀。之后再放于培养箱中进行培养。培养箱的温度保持在36.5±0.5°C,同吋控制培养箱的气体，保证细胞所需要的氧气以及二氧化碳，观察细胞的生长情况，控制好培养的吋间，一般为72小时左右［3］。1.2.3适量的秋水仙素以及时间秋水仙素在细胞培养中有重要的作用,可以抑制有丝分裂，是细胞培养中纺锤体遭到破坏，这可以使细胞中的染色体得到大量的分裂，从而更加奋利于对核型的分析。可使分裂象细胞停留在分裂中期而获得大量分裂中期染色体以

5、便于核型分析。适量的秋水仙素、相应的吋机以及吋间的长度都会对染色体的分裂有所影响，如果剂量过多、吋间过长会使染色体浓缩；如果剂量不足、吋间过短会使染色体不足；这都是不利用对核型的分析。本次研究中采用的秋水仙素剂量浓度为0.04μg/ml，时间长度为3h。1.2.4离心力将培养的血细胞移出培养箱，放入离心管，并通过离心的方式得到细胞。在这个过程中需要控制好速度，速度过快，细胞容易粘连，速度过慢会使细胞丢失。本次研究采用1700r/min离心10min。1.2.5低渗低渗是使染色体制片的一个重要的步骤，主要是让细胞获得充足的水分并破裂，使得染色体得到释放。低滲时需要把握吋间，吋间过长过短

6、都不利于核型的分析［4］。本次研究采用主要加入0.075mol/L低渗液6mL,吋间为30min左右。1.2.6固定在结束低渗后，使用新鲜配置的固定液（甲醇与冰醋酸以3:1的比例进行配制）1ml进行固定，并通过离心的方式将清液舍弃。在静止一段时间后，再进行固定离心舍弃清液的步骤。本次研究采用1200r/min离心10min。1.2.7染色体制片首先要保持载玻片的清洁程度，需要对进行消毒清洁。在细胞液中加入固定液0.5ml,并用轻轻吹打混合的液体。将其滴在载玻片上，并轻轻吹开，使细胞可以分散。同时将载玻片在酒精灯上进行微烤，把握时间，再在空气中进行自然地风fl5】。本次研究烤片釆用70°C,

7、吋间为3h左右。在制片的吋候应该多制几张，以保证成功率。同时，将剩余的细胞液保存起来，放于冰箱内，以便再次制片。1.2.8消化及染片将烤好的染色体制片放在培养箱中，经过Id后再进行染色，使用PH值为7.1的0.025%胰蛋白酶的消化酶，将烤片放在该溶液中处理，吋间为30s左右，并不断摇晃，使其接触充分。之后再放入盐水中进行漂洗，漂洗后放入PH7.2的PBS稀释的姬姆萨染液进行染色，吋间为8min[6]o再将制片冲洗晾干后