蚤类染色体的制片方法及分带技术1)

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1、遗传HEREDITAS(Bcijing)12(6)-32-331990实验技术与方法蚤类染色体的制片方法及分带技术”曹丽萍2)何麟（第一军医大学寄生虫学教研室，广州，510516)本文首次介绍了蚤类染色体的空气干燥制片方法和分带技术。以蚤成熟三龄幼虫和成蚤生殖腺为材料，采用体外短期培养、空气干燥、Giems‘染色技术制片，具取材容易、操作简便、中期分裂相多且染色佳、标本不需封片即可长期保存等优点，克服了以往醋酸地衣红压片法染色体分散不佳、杂质多、染色易褪色及标本需封片才能保存等缺点。在印鼠客蚤等四种蚤的染色体研究中均获得满意效果，成功率高，重复性好，尤以生殖腺染色体

2、制片成功率为100肠。在此基础上还摸索建立了蚤类染色体的C一分带、G一分带和银染技术。关键词：蚤，染色体，分带蚤类染色体研究不论就其本身种类而言，还是与其它医学昆虫相比可谓微乎其微，国内一、染色体常规制作技术尚未见到有关文献，国外仅报道了6种蚤的染（一）幼虫脑组织染色体制片法（图版I,a)色体数目和减数分裂观察的结果〔4,91，未作核型1．培养挑取健壮活跃的成熟幼虫，用分析和分带研究，追其原因染色体制作技术的含青、链霉素的Ringer氏液洗3次，用解剖落后是一个重要方面。以往蚤类染色体制作是针在虫体第3-4节间切断，取头前端置于含以幼虫生殖腺、肢芽组织和虫卵为材料，

3、沿用醋15%小牛血清和抗菌素的Ringer氏液或酸地衣红等染料的压片法〔，，］，该法主要缺点是RPMI-164。培养液中，再加人秋水仙素使其最细胞和染色体分散不佳、背景杂质多，影响观察终浓度为70-100Fzg/ml,250C恒温箱培养计数和显微照相；染色易褪色、标本需封片才能3-4小时。保存且中期分裂相不多，成功率低。我们参考凌2．低渗吸弃培养液，加人新配制的预发瑶[i1,Dybanlb〕等介绍的其它昆虫和动物染色瘟至25℃的10%o柠檬酸钠溶液；25℃低渗体制作方法，摸索和建立了适合蚤类的染色体30-50分钟，中间换液1次。空气干燥制作法。该法以蚤成熟三龄幼虫脑

4、组3．固定吸弃低渗液，加人新配制的甲织和成蚤生殖腺为材料，采用体外短期培养、醇冰醋酸（3:1)液，4℃固定1-2小时，中101换空气干燥，Giemsa染色技术制片，具取材容液2次。固定时间稍长或冰箱过夜对制片无不易、操作简便、中期分裂相多、成功率高且标本良影响。不需封片即可长期保存等优点，在印鼠客蚤等CaoLipingetal.:Air-dryingandBandingTech-4种蚤的染色体研究中均获得理想的结果，在niquesforFleasChromosomePreparation此基础上还建立了较满意的蚤类C,G一分带和1)印鼠客蚤、秃病蚤蒙冀亚种由军事医学

5、科学院五所和内蒙古流行病防治研究所提供，特此致谢。银染方法，为蚤类染色体的研究提供了新的技2)现在广州军区总医院血液室工作，邮政编码5100100术手段。现介绍如下；本文于1989年11月13日收到。4．解剖制片吸弃固定液，滴加60并醋EDTA混合液（1:1)，轻轻摆动60秒左右。混酸处理30分钟以软化组织，然后在解剖镜下小合液用3%Tris调pH7.0左右。PBS(pH心分离出脑神经组织，耐心细致地撕拉转磨，使6.8）漂洗2-3次，晾干。细胞充分散开，空气干燥。3．染色，1:20的Giemsa液染色15-205．染色用1/15MolZml磷酸缓冲液分。(pH6.8

6、-7.0)稀释的Giemsa(1:10）染色（三）快速银染法（图版I,e)15-20分钟，自来水冲洗，晾干。参照谭安鸣〔z，和首都医学院的方法改良后（二）成蚤生殖腺染色体制片（图版I,b)使用。1．解剖用氯仿将蚤麻醉，Ringer液清1.60℃水浴预热底部垫有湿滤纸的培养洗数次，雌雄分开解剖。在解剖镜下于虫体胸皿及蒸馏水。腹连接处切断，分离出生殖腺。雄性有分列左2．玻片经或不经70呱酒精处理，滴上右的椭圆形辜丸1对、输精管、储精囊、射精管50%AgNO3-tj2明胶（2:1)混合液，覆上擦和副腺等组成。雌性有1对卵巢、输卵管和交镜纸，用镊子掀动纸片数次，使染液扩散均

7、匀后配囊等组成。每一卵巢一般有6-8个无滋式置培养皿玻条上。卵巢小管，端部细而基部粗，从端部到基部依次3.10-20分钟滤纸变棕褐色时，用预热蒸有不同发育阶段的生殖细胞和卵。馏水冲洗，晾干。一般不需复染。2．培养、低渗、固定和制片其步骤同＿L。培养用黑色反应板便于观察，换液可用作初步体会为解剖针的注射器吸取，这样细小生殖腺不易（一）取材问题丢失。昆虫的染色体制片不外乎取材于幼虫脑组织，蛹之精巢及虫卵，如蝇、蚊、嶂螂等[1,31。但二、染色体分带技术蚤类成熟幼虫远较蝇幼虫为小，分离脑组织十（一）染色体C一分带（图版I,c)分困难，故我们切下整个幼虫头部先培养，后解