黄梁木染色体制片体系的建立

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1、学校代码：10564学号：2016307626分类号：Q243密级：硕士学位论文黄梁木染色体制片体系的建立宋亚男第一指导教师：彭昌操教授第二指导教师：赵小兰副教授学院名称：林学与风景园林学院专业学位类别：农业硕士领域：林业答辩委员会主席：徐建民研究员中国·广州2018年6月感谢特此感谢以下项目支持：国家自然科学基金（30771759,31170636，31470681）国家重点研发计划（2016YFD0600104）广东省自然科学基金重点项目（2016A030311032）广州市科技计划重大项目（201607020024）广东省林业科技创新重点项目（2016KJCX003

2、）华南农业大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名：日期：学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属华南农业大学。学校有权保存并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许学位论文被查阅或在校园网上发布并供校内师生和与学

3、校有共享协议的单位浏览（除在保密期内的涉密论文外）；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以允许采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。作者签名：日期：导师签名：日期：学位论文提交同意书本学位论文符合国家和华南农业大学关于研究生学位论文的相关规定，达到学位授予要求，同意提交。导师签名：日期：学科带头人签名：日期：I摘要黄梁木（Neolamarckiacadamba），为茜草科团花属常绿阔叶乔木，是一种重要经济速生林木，具有较高应用前景和开发价值。但目前黄梁木的研究主要集中于种质资源收集、组织培养及快繁体系建立和药用价值开

4、发等方面，其细胞学研究相对较少，遗传背景尚不清晰。本文旨在利用染色体制片方法研究黄梁木染色体数目，为全基因组测序和遗传图谱的构建奠定基础。本研究通过建立黄梁木染色体制片体系，获得适合黄梁木染色体观察的制片方法，即改良压片法，进而确定黄梁木染色体数目。制片体系主要步骤如下：1、以黄梁木（Neolamarckiacadamba）组培苗根尖为试验材料进行染色体压片。在9:00-10:00取材，其染色体中期分裂指数最高，达4.7%；其次黄梁木根尖生长长度不应过长，一般控制在3-6mm为宜。2、以0.10%秋水仙素溶液和2mM8-羟基喹啉等体积混合液作为预处理液，于25℃处理3h，

5、其中期分裂相染色体分散良好且易于计数。3、以75mMKCl溶液作为前低渗液，于25℃处理30min压片效果最好，染色体分散于整个细胞中。4、以新鲜配制的卡诺固定液于4℃固定24h细胞状态最好，细胞质背景最清晰。5、以1M盐酸作为解离试剂，在恒温60℃水浴条件下解离根尖6min，细胞壁软化程度刚好，压片时细胞分散性最好。6、以去离子水与75mMKCl溶液对根尖组织后低渗30min，压片结果显示染色体分散程度均较好且差别不大，因此为提高制片效率，采用去离子水作为后低渗液。7、以卡宝品红作为染剂染色2min效果最好，细胞核和染色体为紫红色，细胞质接近无色，对比明显。8、黄梁木体

6、细胞染色体数目为2n=44，根据前人对茜草科的研究，推测其染色体基数X=11，是四倍体。关键词：黄梁木；染色体制片；染色体数目IIEstablishmentofthechromosomeproductionsystemofNeolamarckiacadambaSongYanan(CollegeofForestryandLandscapeArchitecture,SouthChinaAgriculturalUniversity,GuangzhouGuangdong510642,China)Abstract:Neolamarckiacadamba,anevergreenbro

7、ad-leavedtreebelongstoRubiaceaefamily,isanimportantfast-growingforestwithhighapplicationprospectanddevelopmentvalue.Todate,theresearchofNeolamarckiacadambaismainlyfocusedongermplasmresources,tissuecultureandestablishmentofrapidpropagationsystem,medicinalvaluedevelop