反相高效液相色谱法测定滇桂艾纳香中绿原酸的含量

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1、反相高效液相色谱法测定滇桂艾纳香中绿原酸的含量雷婷林翠梧陈海燕黎贵卿【摘要】　　目的用反相高效液相色谱法建立滇桂艾纳香中绿原酸的含量测定方法。方法KromasilC18(4.6mm×150mm,5μm)色谱柱，流动相为0.2%磷酸乙腈（93∶7），检测波长326nm，流速1.0ml/min。结果在该色谱条件下，绿原酸在15.3～61.2mg/L范围内与其峰面积呈良好的线性关系，相关系数为0.9992。样品平均回收率为100.5％，RSD为1.2%（n=6）。结论方法简便易行，结果准确，重复性好，可用于滇桂艾纳香中绿原酸含

2、量的测定。【关键词】滇桂艾纳香绿原酸高效液相色谱法　　Abstract：ObjectiveToestablishamethodfordeterminationofchlorogenicacidinBlumeariparia(Bl.)DC.byHPLC.MethodsColumnasilC18(4.6mm×150mm,5μm).Themobilephaseandflol/min.ResultsInthiscondition,chlorogenicacidshog/L,r＝0.9992.Theaveragerecoveryet

3、hodisreliable,simpleandaccurate.ItcanbeuseforthedeterminationofchlorogenicacidinBlumeariparia(Bl.)DC.　　Keyeariparia(Bl.)DC；Chlorogenicacid；HPLC　　滇桂艾纳香Blumeariparia(Bl.)DC为菊科艾纳香属多年生木质草本植物，在我国仅分布在贵州、云南、广东、广西等省少数湿热地区〔1〕。以滇桂艾纳香为原料生产的妇血康颗粒具有止血、活血、祛淤、生肌及促进子宫复旧的功效。多年的临床研

4、究表明，该产品独特的功效成分能迅速到达病灶，加速子宫内膜脱落、血管闭合，使卵巢功能迅速恢复正常，取效迅速。它填补了当今对“功血”病和上环后出血治疗尚无特效药的空白〔2〕。但目前对于滇桂艾纳香化学成分的研究很少，其中药材和相关制剂缺乏内在的质量评估标准。笔者在前期对滇桂艾纳香的化学成分分离及活性研究的基础上，确定绿原酸为滇桂艾纳香的主要药效成分之一〔3~5〕。本实验建立了滇桂艾纳香中绿原酸的反相高效液相色谱测定方法。　　1仪器与试剂　　高效液相色谱仪：LabAlliance公司，prep100泵，LabAlliancemed

5、ol500检测器，N2010双通道色谱工作站；SK3310LHC超声清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；AL204型电子分析天平（梅特勒－托利多仪器有限公司）；绿原酸对照品为成都福润德实业有限公司提供，含量在99％以上；滇桂艾纳香干草（广西桂西制药有限公司提供）。乙腈、甲醇为色谱纯试剂，乙醇、磷酸为分析纯试剂，重蒸水自制。　　2方法与结果　　2.1色谱条件KromasilC18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm)；流动相为0.2％磷酸－乙腈（93∶7）；流速1.0ml·min-1；检测波长326nm〔6〕；柱温为室温；

6、进样量10μl。　　2.2对照品溶液制备精密称取绿原酸对照品25.5mg,用甲醇溶解并定容至50ml，摇匀。分别移取0.3，0.5，0.7，0.9，1.2ml于5只10ml容量瓶中加甲醇至刻度，摇匀。得到浓度分别为15.3，25.5，35.7，45.9，61.2mg/L的溶液。　　2.3供试品溶液的制备将滇桂艾纳香干草干燥后粉碎，过20目筛，混合均匀后精密称取1.5g置于具塞烧瓶中，准确加入53%乙醇50ml，称定重量，用超声波80℃提取1h，放冷，再称定重量，用53％乙醇补足减失重量，摇匀备用。　　2.4线性关系考察精密

7、吸取对照品溶液10.0μl，注入高效液相色谱仪，依法测定，见图1。以峰面积分值为纵坐标（Y），样品浓度（mg/ml）为横坐标（X），绘制标准曲线，结果表明绿原酸在15.3～61.2mg/L范围内呈良好的线性关系。回归方程为：Y=12494X-128013，r=0.9992。　　图1对照品（左）和样品（右）色谱图（略）　　2.5精密度实验精密吸取“2.3”项制备的样品溶液10μl，重复进样6次，测定峰面积，RSD为0.72%，精密度良好，其色谱峰见图1。　　表1回收率实验结果（略）　　2.6稳定性实验取供试品溶液，于制备后0

8、，2，4，7，24h进样10μl，测定峰面积，RSD为0.45％，结果表明样品溶液在24h内稳定。　　2.7重复性实验称取同一批样品6份，按照“2.3”项下的方法处理并测定含量，RSD为0.71%。　　2.8回收率实验精密称取已知含量的样品6份，并分别精密加入一定量的对照品，按“2.3”项下方法处理并测