高免血清制备及效价测定

《高免血清制备及效价测定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、高免血清的制备及效价测定目的意义1、了解高免血清的制备过程；2、学习家兔采血的方法和血清分离方法；3、学习琼脂双向扩散法检测血清效价。实验原理抗原进入机体后，被机体的抗原递呈细胞所识别并加以处理，递呈给B淋巴细胞，B淋巴细胞增殖、分化形成浆细胞，浆细胞分泌产生特异性抗体。（示意图）该特异性抗体与相应抗原在电解质存在的情况下，在琼脂凝胶中相对扩散，相遇时结合形成肉眼可见的抗原抗体复合物，由于复合物分子较大，不能继续扩散，所以在琼脂凝胶中沉淀下来，形成肉眼可见的沉淀线。此法可鉴定所制备的高免血清的特异性，并检测出其效

2、价。（示意图）。实验材料实验动物：健康成年家兔，体重1.5-2.0Kg；药品：沙门氏菌油乳剂灭活苗（自制）；消毒酒精及碘酒；琼脂粉；硫柳汞、NaCL等；器械：剪刀、镊子、止血钳、三角瓶、平皿、打孔器等。操作步骤1、家兔的免疫在家兔的两后足跖部皮下（或皮内）注射含有完全佐剂的抗原0.1ml，抗原含量5mg/ml初次免疫；待两侧腹股沟淋巴结肿胀后注射含有完全佐剂的抗原0.1ml，7-10天后，脊柱两侧多点（颈、胸、腰椎各2点、共6点）皮下注射含不完全佐剂的抗原，每点0.5ml；7-10天后脊柱两侧重复注射1次；7-1

3、0天后试血，不合格者重复脊柱两侧注射。2、琼脂扩散平板的制备称取一定量的琼脂按1%左右的比例加入生理盐水，加热煮沸充分溶解，稍冷后加入终浓度1/万的硫柳汞混匀，将上述溶液倒入平皿中，厚度约为2-3mm，待凝固后用打孔器在其上打中间一孔，周围六孔的梅花形孔，孔径为2mm，孔间距3-4mm，挑出孔内琼脂，注意不要挑破琼脂边缘，然后在酒精灯火焰上缓缓加热，使孔底少量琼脂溶化封住孔底。3、试血取耳缘静脉血待凝固后分离血清，用生理盐水将血清作2倍系列稀释后加入梅花形孔周围孔，中间孔滴加抗原，以加满为宜，加毕后，盖上皿盖，将

4、平皿置湿盒中，37℃扩散24-48小时，观察结果。4、免疫家兔的采血方法有颈动脉放血和心脏采血。颈动脉放血时，将兔仰卧，固定于兔台，剪去颈部的毛，切开皮肤，钝性分离肌肉，暴露出颈动脉并分离与颈动脉伴行的迷走神经，远心端用止血钳夹住，近心端用止血钳夹住约1/3，两止血钳间间隔约2-3cm。斜剪断近心端血管，血液导入灭菌三角瓶中，放血过程中要严格按无菌要求进行。5、高免血清的分离收集的上述血液置室温下约1h左右待凝固后，置4℃过夜析出血清后，再无菌分离血清。6、血清物理性状检查观察血清是否清亮、透明以及颜色，是否有溶

5、血等。结果分析1、记录本组家兔采血的方法以及血清分离效果。2、简述琼脂扩散试验的注意事项及结果。思考练习1、制备高免血清时，是不是免疫次数越多越好。2、琼脂扩散试验检出的是凝集抗体吗？3、琼脂平板中加硫柳汞等防腐剂有何作用？