高效液相色谱法测定热咳喘胶囊中黄芩苷的含量

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1、高效液相色谱法测定热咳喘胶囊中黄芩苷的含量　　热咳喘胶囊为我院自制制剂品种，全方由黄芩、麻黄、天竺黄和地龙等17味中药组成，具有清热化痰、止咳平喘的作用，用于热痰所致的咳嗽、咯痰、气喘等症；以及急性支气管炎、慢性支气管炎急性发作见以上症候者。原标准未建立含量测定方法，为增强制剂质量的可控性，我们参照相关文献［1］，用高效液相法测定黄芩中黄芩苷的含量，并对测定方法进行了方法学考察，取得了满意结果。　　1仪器与试药　　高效液相色谱仪：LC10ATvp泵、SPD10Avp紫外检测器、CTO10ASvp柱温箱（日本岛津）；ShimadzuLibrorAEL40SM(十万分之一)天平（日本岛津）；甲醇

2、（色谱纯，天津市大茂化学试剂厂）；水（重蒸馏，临用前制备）；磷酸（分析纯，天津市大茂化学试剂厂）；黄芩苷对照品（中检所，批号：110715200212，供含量测定用）；热咳喘胶囊样品（自制，批号：051101，051102，051103）。其余试剂均为分析纯。　　2方法与结果　　2.1色谱条件色谱柱：DiamonsilC18(5μm,250mm×4.6mm，迪马)；流动相∶甲醇∶水∶磷酸（47∶53∶0.2）；流速：1ml/min；柱温：30℃；检测波长：280nm。理论板数按黄芩苷峰计应不低于2500。　　2.2对照品及供试品溶液的制备　　2.2.1对照品溶液制备精密称取在60℃减压干燥4

3、h的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每毫升含45μg的溶液，即得。　　2.2.2供试品溶液制备取供试品内容物约1g，精密称定，精密加入70%乙醇100ml，称定重量，超声处理30min，取出，放冷，用70%乙醇溶液补足减失重量；精密量取2ml置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。　　2.2.3阴性溶液制备取除黄芩以外的其他药材，按制备工艺制成缺黄芩阴性样品。取黄芩阴性样品，按2.2.2项下方法制备，即得。　　2.3系统适用性试验分别取黄芩苷对照品溶液、供试品溶液及缺黄芩的阴性对照溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。从色谱图可知，在此色谱条件下

4、，样品有与对照品黄芩苷相同保留时间的对应峰，并与其他组分峰达完全分离，阴性对照无干扰。　　2.4线性关系考察精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇稀释制成0.04525mg/ml的黄芩苷对照品溶液，分别精密吸取黄芩苷对照品溶液5，10，15，25μl，注入液相色谱仪，测定峰面积积分值，测定结果见表1，并以对照品进样量X（μg）为横坐标，峰面积值Y（mv.s）为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：Y=811224.3094X-47854.3，r=0.9998。结果表明，黄芩苷在0.22625～1.13125μg范围内线性关系良好。　　表3稳定性实验结果（略）　　2.7重复性实验精密称取本品内容物共5份

5、，照前述2.2.2项下的制备方法制备成供试品溶液，测定黄芩苷含量。结果表明本法重复性良好。结果见表4。　　2.8回收率实验采用加样回收法实验，精密称取已知含量的同一批样品（黄芩苷含量为18.5378mg/g）6份。各约0.5g，精密加入黄芩苷对照品适量，按2.2.2项下的方法制备成供试品溶液，测定，计算回收率。结果见表5。　　表4重复性实验结果（略）　　表5加样回收试验结果（略）　　2.9样品含量测定取热咳喘胶囊3批，按2.2.2项下制备方法，分别制成供试品溶液，精密吸取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，以标准对照法计算各样品中的黄芩苷含量。结果见表6。　　表6样品中黄芩苷的含量测定结果（略

6、）　　*为每粒中含量　　3讨论　　本实验过程中，曾参照相关文献［2,3］，选用甲醇0.2mol/L磷酸二氢钠溶液（pH3.0）(40∶60)；甲醇水（50∶50）为流动相，结果黄芩苷峰分离均不如正文方法理想。供试品处理以回流提取、超声提取进行比较实验，结果回流提取效率和超声提取效率相当，由于超声提取操作方法简便，所以选择超声提取为样品提取方法。供试样品提取时间的考察中，对同一批样品进行不同提取时间（15，30，45，60min）考察，结果表明，供试样品中的黄芩苷在30min以上含量变化已不大，说明黄芩苷基本提尽，故选30min为提取时间。　　参考文献：　　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部

7、［S］.北京：化学工业出版社，2005：211.　　［2］唐晓春，张纲，黄桂方，等.高效液相色谱法对甘露颗粒剂中黄芩甙含量的测定［J］.湖南中医学院学报，1998，18（1）：11.　　［3］刘福，吴功柱.HPLC法测定复方黄芩颗粒剂中黄芩苷的含量［J］.川北医学院学报，2002，15（2）：74.