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1、红毛五加中多糖的含量：章丽华 张利平 胡锦群 冯丽娟 张龙清 张莅峡【摘要】：目的建立红毛五加中多糖的含量测定方法。方法采用3,5-二硝基水杨酸比色法(DNS法),测定红毛五加中的还原糖和总糖的含量,并计算出总多糖的含量。结果以葡萄糖为对照品,线性范围为46.6～233.0mg/L(r＝0.9992),加样回收率为99.0%～102.1%；红毛五加中总多糖含量1.3～1.9mg/g。结论本方法灵敏、稳定、重复性好,有助于红毛五加质量控制方法的研究。【关键词】红毛五加多糖 葡萄糖 3,5-二硝酸水杨酸比色法 Abstract：Object
2、iveToestablishamethodforthequantitativedeterminationofAGP(AcanthopanaxgiraldiiHarmspolysaccharides).MethodsAGPcontentinedbyDNSMethod.Theabsorptionsofprocessedsamples.ResultsContrasttoglucose,thelinearrangeg/L(r＝0.9992),theaveragerecoveryeasuredin3batchesofsamplesg/g.Concl
3、usionThemethodissensitive,steadys. Keyspolysaccharides(AGP)；glucose；DNSmethod 红毛五加(AcanthopanaxgiraldiiHarms)是五加科五加属植物,主产于我国四川省[1-2]。四川省的红毛五加资源丰富,蕴藏量大,每年春天采收茎枝后,翌年仍生长茂盛。红毛五加与其它五加科植物不同,药用部位为茎皮,这对野生植物资源的保护无疑是十分有益的。我国已故著名的生药学家楼之岑先生在《常用中药材品种整理和质量研究》一书中建议将红毛五加列为《中华人民共和国药典》品种
4、[3],目前尚未实现,但研究工作在不断深入,近几年来对红毛五加的研究进展较快,取得许多成果。化学成分研究表明,红毛五加主含挥发油、皂苷类、木脂素类、核苷类、多糖类、氨基酸、有机酸及微量元素等多种活性成分。药理作用研究证实,其具有抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗辐射、保肝、调节心脑血管及机体免疫功能作用等[4-7]。红毛五加活性成分之一的多糖类对免疫调节作用、抗肿瘤及抗病毒作用尤为突出,并在临床得以证实[8]。为有效地控制药材质量,一般选用苯酚-硫酸法或硫酸蒽酮比色法[9-10]进行总糖测定,因总糖中包括单糖和多糖,不能明确地表明其中的多糖含量。另
5、外,硫酸具有较强的腐蚀性,给实验操作带来极大不便。本试验采用3,5-二硝基水杨酸比色法(DNS法)[11-12],以葡萄糖作为对照品,通过测定总糖及还原糖的含量,计算出多糖含量。本法灵敏、稳定、重复性好,适用于含多糖类中药的质量控制研究。 1材料 1.1多糖的分离与提取 取红毛五加皮,经粉碎,过40目筛,称取500g,加适量水湿润2h,装入渗漉筒中,加水浸没药材,浸渍6h后,开始渗漉。以5mL/(min·kg)的漉速渗漉,收集8倍量的渗漉液,减压浓缩至相对密度1.04～1.06(室温)。加乙醇沉淀,使最终含醇量达70%,静置,分层后
6、分离,取醇沉物进行真空干燥(60℃以下),得浅黄色红毛五加多糖提取物,经3批红毛五加多糖提取,其提取率分别为1.40%、1.20%、1.41%。 1.2仪器、试剂及药材 UV-2550型紫外-可见分光光度计,SHIMADZU(日本)生产。 无水葡萄糖(含量测定用,批号0833-9501),中国药品生物制品检定所提供；3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂,上海润捷化学试剂有限公司产品；所用其它化学品试剂均系分析纯。 DNS试液的配制：称取6.3gDNS和262mL2mol/L氢氧化钠溶液,加到500mL含有182g酒石酸钾钠的热水溶液
7、中,再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠,搅拌溶解,冷却后加蒸馏水定容至1000mL,贮于棕色瓶中,7d后使用。 红毛五加药材购自成都市,由中国中医科学院中药研究所谢宗万研究员鉴定为红毛五加茎皮。 2方法与结果 2.1溶液的制备 2.1.1对照品浓溶液的制备 精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖适量,置50mL容量瓶中(1mg/mL),加水定容至刻度,混匀,置4℃冰箱保存备用。 2.1.2对照品稀溶液的制备 分别取上述浓对照品液若干(1～5mL)置25mL容量瓶中,用水稀释至刻度,混匀,备用。 2.1.3还原糖供试品溶液的制备
8、精密称取本品约40mg,置25mL量瓶中,加适量水振摇,使其充分溶解,并用水稀释至刻度,摇匀,过滤,弃初滤液,取续滤液,备用。 2.1.4总糖供试品溶液的制备 精密称取本品约40mg,置5
