苯酚硫酸比色法测定红毛五加皮多糖的含量

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1、苯酚硫酸比色法测定红毛五加皮多糖的含量作者：钟世红，卫莹芳，古锐，黄小雪，谢武超，杨湘【摘要】　　目的建立红毛五加皮多糖的含量测定方法，对不同产地样品进行测定。方法采用苯酚-硫酸比色法。结果葡萄糖的线性范围为24.05～54.11μg/ml，平均加样回收率为97.80%，RSD为1.59%（n=6）。红毛五加皮的多糖含量为6.83%～24.50%；木心的多糖含量为5.78%～9.21%。结论该方法快速、准确，可为红毛五加药材的质量控制提供参考。建议红毛五加皮多糖含量不得低于10.9%，木心具有一定利用价值。【关键词】红毛五加皮　多糖　苯酚-硫

2、酸比色法　　Abstract：ObjectiveTodeterminethecontentofpolysaccharidesincortexacanthopanacisgiraldiifromdifferentregions.MethodsPhenol-sulfuricacidcolorimetryinethecontentofpolysaccharides.ResultsThelinearrangeofglucosel.Theaveragerecoveryethodisrapid,accurateandcanbeusedforthequant

3、itycontrolofA.GiraldiiHarms.Thepolysaccharidescontentofbarkshouldnotbeloisvaluableinsomedegree.　　Keyetry红毛五加皮为四川地区的习用药材和岷江上游羌民族特色药材，收载于《四川省中药材标准》1987年版，具有祛风湿、强筋骨、利关节之功效。作为红毛五加中的一类主要有效成分，红毛五加多糖（AGP）已被广泛证实具有提高免疫［1］、抗肿瘤［2］、抗病毒［3］等药理活性。因此，多糖含量是评价红毛五加皮质量的重要指标。本研究建立了以苯酚-硫酸比色法测定红毛五

4、加皮中多糖的方法，并对不同产地样品进行了含量测定，以期为该药材的质量控制提供科学依据。　　1仪器与试药　　1.1仪器UV1102紫外/可见分光光度计（上海天美），电子天平（SartoriusBS224S北京）。　　1.2试药试剂D-葡萄糖对照品（分析纯，成都市科龙化工试剂厂）。4%苯酚为182℃馏分加蒸馏水配制而成，乙醇、丙酮等试剂均为分析纯。水为蒸馏水。　　1.3样品自采或购买，经成都中医药大学卫莹芳教授鉴定为红毛五加AcanthopanaxgiraldiiHarms的干燥茎皮及木心。样品均粉碎为中粉。　　2方法与结果　　2.1红毛五加多糖的

5、提取与精制称取红毛五加茎皮粉末60g，置索氏提取器中，依次用石油醚（60～90℃）、乙醚、80％乙醇回流提取至无色（各约8h）。残渣挥干乙醇，每次加水800ml回流提取1h，共提取4次，趁热过滤，合并滤液，减压浓缩至约200ml。加95％乙醇使含醇量为80％，搅匀，冰箱中静置过夜，抽滤得粗多糖。加水配成1％粗多糖溶液，Sevage法脱蛋白［4］。加入30％H2O2脱色［5］。所得溶液减压浓缩至约200ml，加入95％乙醇使溶液含醇量为80％，搅匀，冰箱中静置过夜，抽滤得下层多糖。以无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤多糖，60℃真空干燥，得黄白色的红毛

6、五加精多糖粉末。　　2.2供试品溶液制备方法考察称取红毛五加茎皮粉末约1.0g，共4份，精密称定，置索氏提取器中，加入80%乙醇回流提取至无色。残渣挥干乙醇，每次加水适量回流提取30min，其中2份提取3次，另2份提取4次，抽滤，合并滤液置500ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度。分别精密吸取各供试品溶液0.8ml，各加入1.2ml蒸馏水、4％苯酚溶液1.0ml，摇匀，加入浓硫酸5.0ml，40℃水浴加热15min，置冰水中冷却5min，于487nm测定吸光度。结果无明显差异。　　遂确定供试品溶液的制备方法为：精密称取样品粉末约1.0g，置索氏提

7、取器中，加入80%乙醇回流提取至无色。残渣挥干乙醇，加水适量回流提取3次，30min/次，抽滤，合并滤液置500ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，备用。　　2.3标准曲线的绘制精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品适量，配制成0.30mg/ml的对照品溶液。分别精密量取该对照品溶液4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，9.0ml置50ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，备用。再精密量取上述稀释的对照品溶液各2.0ml，按“2.2”项下自“加入4％苯酚溶液1.0ml……”起，同法测定。以吸光度（Y）对葡萄糖质量浓度（X）进行回归分析，得出其回归

8、方程为Y=0.0137X-0.0004，r=0.9998，表明葡萄糖质量浓度在24.05～54.11μg/ml范围内呈现良好的线性关系。　　2.4换算