苯酚硫酸法测定多糖.doc

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1、苯酚—硫酸法测定党参总糖1．材料与方法1．1材料与试剂，仪器1.1.1材料、试剂党参（肉党、普通纹党、产于中寨的纹党）；95％乙醇；苯酚；浓硫酸均为分析纯。1.1.2仪器与设备FA-2400分析天平，101A型电热鼓风干燥箱，Mb型可调式电热板，电热恒温水浴锅，SK5200H超声清洗器，UV-9100紫外-可见分光光度计1.2方法1.2.2供试品溶液的制备取党参粉末2g，置圆底烧瓶中，加95％乙醇3次（20.20.20ml）每次2h,过滤，蒸干乙醇，残渣用水溶解，在电热板上加热，提取3次（50.50.50ml

2、）,每次2h，过滤，滤液置于50ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度摇匀。1.2.3标准溶液的配制精密称取105℃干燥至恒重的D-无水葡萄糖10mg置于100mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度摇匀，得0.1mg／mL的储备溶液，备用。1.2.35％苯酚溶液的制备精确量取6.3ml80％的苯酚溶液转移至100ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀后置于棕色试剂瓶中，备用。(实验室苯酚为师姐配好的80％的溶液，避光密封保存于冰箱中，用时水浴加热使其成为透亮的溶液)1.2.4标准曲线的制备精确吸取葡萄糖标准液0、1、2、3、4

3、、5、6mL，分别置于10mL容量瓶中，以蒸馏水补至10mL摇匀，依次吸取2ml加入试管中，加入苯酚液1.0mL和浓硫酸5.0mL，混匀，在室温放置30min后，于波长490nm处测定吸光度值。以吸光度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制标准曲线。(10*10-2mg.ml*1/10=10*10-3mg.ml-1=10mg/ml.20.30.40.50.60)1.2.5样品的测定准确吸取供试品溶液0.1mL加水定容至10mL，精确吸取此稀释液2mL于试管中，按标准曲线制备的方法测定吸光度值，并根据回归方程，求得

4、其浓度，计算样品中总糖的含量。（党参溶液的浓度=2/50*0.1/10=1/2500g.ml-1=1/2.5mg.ml-1=400mg.ml-1）2结果与分析2.1标准曲线标准曲线回归方程建立用紫外分光光度计，在490nm的波长处测定吸光度，以试剂空白参比实验。结果见表1标液体积(ml)02468标液多糖含量(mg)0481216吸光度00.1710.3790.6660.992Y=0.062X-0.0542，r2=0.9826，以吸光度为纵坐标葡萄糖浓度为横坐标绘制标准曲线见图y=0.062x-0.0542R

5、2=0.9826-0.200.20.40.60.811.205101520糖含量（mg）吸光度系列1线性(系列1)2.2样品中多糖含量测定结果按上述多糖含量测定方法测的样品的吸光度，并按标准曲线测得的多糖含量占药材总量如下表。肉党1肉党2纹党1纹党2中寨纹党1中寨纹党2吸光度0.3620.4870.6220.5790.8740.624占药材含量百分比（％）0.841.091.361.251.371.35上图所得的标准曲线，线性不好，按此曲线药材中所得糖含量也不高，并且当标准溶液液为10ml时，测不出吸光度，所

6、以改变标液浓度浓度，取葡萄糖标准液0、1、2、3、4、5、6mL按上述方法重做，所得的吸光如标液体积(ml)0123456标液多糖含量(mg)024681012吸光度00.1980.5670.8021.0021.3911.579Y=0.135X-0.0185，r2=0.9937，以吸光度为纵坐标葡萄糖浓度为横坐标绘制标准曲线见图y=0.135x-0.0185R2=0.9937-0.200.20.40.60.811.21.41.61.8051015糖含量（mg）吸光度系列1线性(系列1)样品中多糖含量测定结果按

7、上述多糖含量测定方法测的样品的吸光度，并按标准曲线测得的多糖含量占药材总量如下表。肉党1肉党2纹党1纹党2中寨纹党1中寨纹党2吸光度0.7830.6800.9420.8090.8741.047占药材含量百分比（％）7.426.58.97.668.59.87