蛤蟆油对机体细胞免疫调节作用的实验研究

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1、蛤蟆油对机体细胞免疫调节作用的实验研究【摘要】H的：探讨蛤蟆油的细胞免疫调节作用。方法：实验组分别给予0.033、0.33、1.00g/kg体重的蛤蟆油，同时设空白对照组（给予蒸榴水），测定足跖肿胀度和淋巴细胞转化程度。结果：蛤蜞油能提高小鼠的迟发型变态反应，增强ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力。结论：蛤蜞油胶囊具有细胞免疫调节作用。【关键词】蛤蟆油迟发型变态反应细胞免疫调节蛤蟆油是由人工放养的中国林蛙所产的林蛙油、人参、大豆色拉油、维生素E等为原料加工制成的保健食品。本实验对其进行了免疫功能学研究，测定了小鼠的迟发型变态反应和ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力，以评价其细胞免疫调节

2、作用。材料与方法样品：蛤蟆油，由吉林省某科技开发有限公司提供，室温保存，供实验用。实验动物：选用吉林大学医学实验动物部提供的昆明种小鼠（批准号医动字第：10-5107）。选健康雄性小鼠48只，体重18〜22g,分为四组，每组12只，作为免疫一组，进行迟发型变态反应检测；昆明种健康雌性小鼠48只，体重18〜22g,分为4组，每组12只，作为免疫二组，进行ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验。剂量选择：蛤蜞油以每日0.33g/kg体重作为中剂量，上、下各设•个剂量组：l.OOg/kg体重作为高剂量，为人体推荐量的30倍，0.033g/kg体重作为低剂量，为人体推荐量。各剂量组受试物以蒸馏水配制，

3、空白对照组以蒸馏水灌胃。连续灌胃30天后测各项免疫指标。仪器与试剂：电子天平（O.lg）、二氧化碳培养箱、离心机、恒温水浴、酶标仪、显微镜等、无菌手术器械、游标卡尺（精密度0.02mm）、绵羊红细胞（SRBC）、Hank’s液（pH7.2〜7.4）、RPMI1640培养液、小牛血清、刀豆蛋白A（ConA）等。实验方法：①迟发型变态反应（足跖增厚法DTH）[1]:取羊血,每只鼠经腹腔注射2%（V/V,用生理盐水配制）压积SRBC（2000转/分，10分钟），皮下注射20%（V/V，用生理盐水配制）压积SRBC20Ul，于注射后24小时测量左后足0.2ml,致敏后4天，测量左后足跖部厚度，同一

4、部位测量3次，取平均值。然后在测量部跖部厚度，以干预前后足跖厚度的差值（足恥肿胀度）來表示DTH的程度。②ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验（MTT法）[2]:无菌取脾，制成细胞悬液。调整细胞浓度为2X10以ml，加入24孔培养板中，毎孔lml,在其中一孔加50uIConA液（相当于5ug/ml），另一孔作为对照，置5%CO237°C培养箱中培养72小时。培养结束前4小时，每孔轻轻吸去上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT（5mg/mL）50ul/孔，继续培养4小时后，每孔加入lml酸性异丙醇，在722分光光度计上比色测定，波长570nm。淋巴

5、细胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值表示。实验数据用EXCEL软件方差分析方法进行统计。结果蛤蟆油对小鼠迟发型变态反应（DTH）的影响，见表1。蛤蟆油对ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验的影响，见表2。由表1可见，中、高剂量与空白对照组间比较有高度显著性差异（P<0.01）,即蛤蟆油能提高小鼠的迟发型变态反应。由表2可见，低剂量组与空白对照组间比较有显著性差异（P<0.05）,即蛤蟆汕能提高ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力。讨论蛤蟆汕是产于东北地区的名贵滋补品，其主要成分是蛋白质，同时还含有不饱和脂肪酸、糖类、维生素等［3］;人参为五加科植物，主要含有人参皂

6、苷类、人参多糖类成分［4］。有研究表明，蛤蟆油能明显增加外周血T淋巴细胞的酯酶染色率，说明杳提高特异性细胞免疫功能。人参则能显著增强免疫系统的功能，促进T、B淋巴细胞活性。本实验主要是从T细胞的功能检测方面对此进行了研究。结果表明：经口给予小鼠不同剂量的蛤蟆油30天，能增强小鼠的迟发型变态反应，增强ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力，由此判定，蛤蜡油具宥细胞免疫调节作用。【参考文献】1保健食品功能学评价程序与检验方法规范，卫生部.2005.2张桥.卫生毒理学基础.北京：人民卫生出版社，2004:249-252.3江苏新医学院，编.中药大辞典（下）.上海：上海科学技术出版社，1986:33

7、99-3400.4宋立人.现代中药学大辞典（上册）.北京：人民卫生出版社,2001:33-37.