肠缺血再灌注损伤对rho激酶影响及法舒地尔保护研究

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1、肠缺血再灌注损伤对Rho激酶影响及法舒地尔保护研宄王震东（鄂尔多斯市中心医院内蒙古鄂尔多斯017099）【中图分类号】R45【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2015）08-0052-021.引言肠缺血后再灌注（I/R）损伤是指在肠缺血一段时间后又突然恢复供血而出现组织器官损伤，常见于创伤性休克、外科手术、器官移植、烧伤、冻伤和血栓等血液循环障碍。目前研究发现肠缺血后再灌注（I/R）自由基生成增多，而Rho激酶的活化能够诱导氧自由基的生成以及法舒地儿为Rho激酶抑制物。近年来研究发现肠缺血还不足以导致组织损伤，而是在缺血一段时间后突然恢复血供再灌注后，出现

2、肠细胞功能代谢障碍及结构破坏加重。由此，肠I/R损伤的发生机制及防治一直是近年国内外学者研究的重点。2.材料与方法2.1—般资料实验动物雄性健康SD大鼠120只，体重250〜300g。2.2仪器与试剂盐酸法舒地尔注射液购自天津红日药业股份有限公司（批号：1010251）;CytC免疫组化抗体购自SANTACRUZ公司（批号:kl069）；caspase-3免疫组化抗体购自BioworldTechnology公司（批号:360749）,二抗及DAB显色剂由北京中杉公司提供。2.3样品的前处理无创小血管夹夹闭健廉雄性SD大鼠肠系膜上动脉（superiormesenteric

3、artery,SMA>lh、再灌注2h,建立肠缺血再灌注损伤（I/R）模型作为实验组研究对象。其中,法舒地尔干预组为建立I/R模型前20min加入法舒地尔浓度分别为7mg/kg,llmg/kg，15mg/kg进行预处理。2.4实验方法用实验分为三组：正常对照组、(I/R)模型组、法舒地尔干预组。运用Westernblot法分别检测缺血lh，灌注2h灌注3h的Rho激酶功能活化标志物MYPT1的磯酸化水平。测定小肠组织中超氣化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)活性，NF-κB，髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性，

4、內细胞浸润程度，ATP合成，轻自由基以及血清中肌酸激酶-B(creatinekinase-B，CK-B)水平。此外，光镜下观察病理石蜡切片肠组织，如肠粘膜细胞，肠粘膜绒毛的血管的形态学改变。2.5统计学处理实验结果的数据均用SPSS15.0统计软件包进行统计学处理，统计方法采用方差分析、卡方检验(P<0.05)o1.结果肠缺血再灌注(I/R)损伤人鼠镜下肠缺血再灌注损伤形态学改变2.讨论研究发现肠缺血再灌注损伤主要因素不是缺血本身，而是恢复血液供应后,过量的自由基攻击这部分重新获得血液供应的组织内的细胞造成的，并证实肠缺血再灌注I/R不仅可以引起肠道局部损害，严重

5、吋还能因为肠粘膜屏障的破坏使得肠内细菌、内毒素向肠外组织器官移位，进而导致全身炎症反应等全身性并发征，从而导致多脏器功能不全综合征以及多脏器进行性衰竭［3】。黄嚷呤氧化酶(xanthineoxidase,X0)及其前身为黄嘌呤脱氢酶(xanthinedehydrogenase,XD),二者主要存在毛细血管内皮细胞内。正常时XD占90%,X0只占10%o由于缺血组织出现02?-，0H?的清除能力障碍，当自由基过量产生时，人体的防御机制遭到破坏，机体则不能迅速排除过量的自由基，因此它们成为冇害物质进而促使损伤。中性粒细胞被激活吋耗氧量显著增加，其摄入02的70%〜90%在还

6、原型辅酶II氧化酶(NADPHoxidase)和还原型辅酶I氧化酶(NADHoxidase)的催化下，接受电子形成氧自由基，以杀火病原微生物。另外组织缺血可激活补体系统，或经细胞膜分解产生多种具有趋化活性的物质，如C3片段、白三烯等，吸引、激活中性粒细胞。再灌注期间组织重新获得氧供应，激活的中性粒细胞耗氧显著增加，产生大量氧自由基，称为呼吸爆发(respiratoryburst)或氧爆发(oxygenburst),可损伤组织细胞◊[5]此外，冇研究发现低氧可能是通过激活Rho/Rho激酶信号通路，Rho激酶信号通路诱导自由基的产生，由此再次形成更大量的自由基，加重组织的

7、损伤。1.存在问题与进展综上所述，肠缺血后再灌注(I/R)损伤后，Rho激酶引发氧化应激，诱导生成氧自由基，促进炎细胞黏附，损伤血管内皮，引发动脉粥样硬化与血栓形成等症状。临床上应用Rho激酶抑制剂法舒地尔能有效缓解肠的损伤。但是，在了解肠缺血后再灌注(I/R)损伤的同时，0前仍存在一系列临床上的问题需要解决：诸如(1)小肠缺血再灌注导致损伤的程度才决定用药(2)肠缺血再灌注肺损伤机制复杂，其发生和发展与Rho激酶的激活的关系，但在实验设置时还有其他的因素仍需进一步研究排除(3)法舒地尔预处理对肠缺血再灌注导致的肺损伤有保护作用，探讨这种