高效液相色谱法测定中药洗剂中苦参碱的含量

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1、高效液相色谱法测定中药洗剂中苦参碱的含量妇得康洗剂由贵阳舒美达制药厂有限公司生产，主要由苦参总生物碱组成，具有清热燥湿及杀虫的功效，用于慢性盆腔炎、宫颈糜烂、阴道炎之湿热下注症。苦参总生物碱中含有苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱等生物碱类成分，苦参碱的含量测定有报道用气相色谱法、高效液相色谱法（HPLC），但样品处理方法较复杂[1~7]。2006年采用HPLC法测定制剂中苦参碱的含量，该方法操作简便、快速、准确、重现性好，可用于妇得康洗剂的质量控制。1仪器和试药高效液相色谱LC-6A(日本岛津)；TCQ-250超声波清洗仪（北京医疗设备二厂）；电子天平AEG-220（日

2、本岛津）；紫外分光光度仪UV-265（日本岛津）；甲醇为优级纯；乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯；苦参碱对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号：110805-200306）。妇得康洗剂由贵阳舒美达制药厂有限公司提供（批号：20041001、20041002、20041003、20041004、20041101、20041102、20041103、20041201、20041202、20041203）。2方法与结果2．1色谱条件DiamonsilC18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相乙腈-甲醇-磷酸盐溶液（25∶10∶65）；检测波长220nm；流速1m

3、l/min；柱温25℃。2．2供试品溶液的制备取本品50ml，摇匀，精密量取5ml，加浓氨试液调pH＝10后，用氯仿（30、30、30、20、20ml）提取5次，合并提取液，挥干氯仿，加甲醇适量溶解残渣，滤过，滤渣、容器用甲醇洗涤3次，每次5ml，合并洗液与滤液，定量转移至100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。2．3对照品溶液的制备取经P2O5减压干燥至恒重的苦参碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每毫升约含0.530mg的对照品溶液。2．4阴性对照品溶液的制备取缺苦参总生物碱的样品适量，依供试品溶液的制备法，制备

4、阴性对照品溶液。2．5系统适用性试验分别取对照品溶液、阴性对照品溶液、供试品溶液各10μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图。结果表明供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，阴性对照无干扰。理论塔板数为8128。2．6线性关系考察精密称取苦参碱对照品适量，依对照品溶液制备法制备浓度0.106、0.318、0.530、0.742、0.954g/L的溶液，分别精密吸取上述溶液5μl，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，对照品质量为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为：Y=38788X－53（r=0.9998），表明苦参碱在0.53~4.

5、77μg呈线性关系。2．9重复性试验分别精密量取同一样品5份，依供试品溶液制备法制备5份供试品溶液，精密吸取供试品溶液各10μl，依上述色谱条件测定，RSD为0.95%，表明该方法的重复性良好。2．10加样回收率试验精密量取0.5ml已知含量（35.767g/L）的妇得康洗剂5份，分别添加苦参碱对照品适量，按上述供试品溶液制备法制备加样回收供试品溶液，并进行测定，计算回收率，见表1。结果苦参碱的平均回收率为98.6%，RSD为1.17%。2．11样品测定精密量取样品适量，依供试品溶液制备法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液5μl与供试品溶液10μl注入高效液相

6、色谱仪，依上述色谱条件测定，记录苦参碱峰面积，重复测定2次，取平均值。结果见表2。表1苦参碱的加样回收率试验结果210批样品中苦参碱的含量3讨论3．1检测波长的选择精密称取干燥至恒重的苦参碱对照品适量，用流动相溶解配成标准溶液，对苦参碱标准溶液进行全波长扫描，结果表明标准溶液在200nm处有最大吸收，考虑紫外吸收末端干扰大，且样品中苦参碱含量高，故选择检测波长为220nm。3．2流动相的选择选择了3种流动相：(1)乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(1∶9)，氢氧化钠溶液调节pH至6.0；(2)乙腈-0.005mol/L庚烷基磺酸钠溶液(25∶75)；(3)乙

7、腈-甲醇-磷酸盐溶液（25∶10∶65）。经多次测试结果表明，流动相(1)峰分离不好，流动相(2)的峰型不好，出现脱尾现象，流动相(3)出峰时间合理，峰型好，分离度大于1.5。3．3萃取次数的考察取妇得康洗剂5ml，加浓氨试液调pH＝10后，分别用氯仿（30、30、30、20、20、20ml）提取3、4、5、6次，合并提取液，挥干氯仿，加甲醇适量溶解残渣，滤过，滤渣，容器用甲醇洗涤3次，每次5ml，合并洗液与滤液，定量转移至100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，通过比较峰面积，5次萃取基本可将苦参碱萃取完全。3．4根据对10批样品的测定值，暂定本品含苦参总生物碱以

8、苦参碱(C