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4、idinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame【摘要】：帕金森病(Parkinson’sdisease,PD)是一种发生于中老年期的,缓慢进展的神经系统退行性疾病,主要病理改变为中脑黑质致密部(substantianigraparscompacta,SNc)多巴胺(dopamine,DA)能神经元变性死亡,导致纹状体来自黑质的DA能神经末梢减少,从而引起震颤、肌肉僵直、运动迟缓与体位不稳等一系列综合病症(Lothariusan
5、dBrundin,2002)。PD是继阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)之后第二大常见的神经系统退行性疾病,随着人口平均寿命延长和老龄化出现,PD的发病率呈现明显的上升势头。药物治疗以及脑深部电极(deep-brainstimulation,DBS)埋藏治疗可在一定程度上缓解患者的症状,但都存在一些副作用,而且不能从根本上抑制脑内DA能神经元的持续性死亡。近年来神经干细胞(neuralstemcells,NSCs)的研究为细胞替代疗法治疗PD提供了潜在的应用前景,通过移植神经干细胞不但可以来替代部分丢失的
6、的DA能神经元的功能,而且可以通过移植具有分泌神经营养因子特性的细胞抑制DA能神经元的丢失,长期有效地改善患者的症状。在本研究的第一部分,我们利用本实验室建立的胚胎大鼠NSCs的取材和培养方法,分离E14SD大鼠胚胎前脑室下带区(subventricularzone,SVZ)神经组织,在含有多种神经营养因子的无血清培养基中悬浮培养,经传代后培养出大量NSCs标记分子——神经巢蛋白(neuroepithelialstemcellprotein,Nestin)阳性克隆球团。经免疫组织化学方法检测,这些阳性细胞克隆球团经诱导分化后可以
7、分化为神经元、星型胶质细胞和少突胶质细胞,此结果说明本实验取自E14SD大鼠SVZ区域的细胞具有自我增殖和多潜能分化特性。为长期跟踪移植细胞在体内存活、生长、迁移及分化的过程,我们运用用携带有增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)基因的重组腺相关病毒(rAAV_2-EGFP)在体外培养条件下感染NSCs,通过病毒在细胞内表达EGFP使细胞带有绿色荧光标记。实验中发现,被AAV_2-EGFP感染后的NSCs仍具有持续的分裂增殖能力。EGFP标记的NSCs体外诱导分化后,整个细
8、胞从胞体到突起末梢都带有绿色荧光标记,较好显示出了细胞的完整形态,经测定,体外EGFP标记率为65%。在第一部分研究,我们成功建立了NSCs的分离、培养、鉴定和EGFP标记示踪的方法。PD在动物中没有自发倾向,进行PD实验研究需要建立适当的动物模型(陈生弟,陈先
