甘草中角鲨烯高效液相色谱法测定

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1、甘草中角鲨烯高效液相色谱法测定【关键词】甘草;角鲨烯;提取;高效液相色谱　　Abstract：ObjectiveTodeterminesqualeneinGlycyrrhizauralensisFischbyHPLC.　　MethodsTheoilinrootandseedofGlycyrrhizauralensisFisch.about1.16%).HPLCestablishedinthisthesisn:n;mobilephase,V(acetonitrile)∶V(methanol)=60∶40;detection;flol/min;temperature,30℃.　　C

2、onclusionThedeterminationmethodofaqualeneinGlycyrrhizauralensisFisha)，纯度98%。　　1.3仪器Agilent(美国)1100高效液相色谱仪，Vl容量瓶中，用三氯甲烷稀释至刻度，即得浓度为0.214mg/ml的标准品溶液。　　2.2样品的制备采用索式提取法对甘草根进行提取：称取过40目筛的甘草根粉末20g用滤纸包裹装入索式提取器内，同时控制水浴温度恒定为75℃，加入200ml石油醚回流提取至油脂完全溶于石油醚中。取石油醚提取液用旋转蒸发仪旋转蒸发，至无石油醚为止，得黄色甘草根油0.5g，用三氯甲烷定容至10m

3、l。0.45μm微孔滤膜滤过，得甘草根油供试液。同法，以甘草种子为提取材料，分为去皮和未去皮，制得金黄色甘草种油，定容，过0.45μm微孔滤膜，即得甘草种油供试液。　　2.3波长的选择以三氯甲烷为参比，将用三氯甲烷稀释后的甘草根油用双光束紫外分光光度计从190～700nm波长范围内进行扫描。紫外光谱显示甘草根油在210，286nm处有两个最大吸收峰。而角鲨烯结构是孤立双键，因此不会在286nm处有强吸收，故210nm处应为角鲨烯的最大吸收波长，因此检测波长定在210nm。　　2.4提取溶剂的选择由于油脂极性较小，且角鲨烯是不饱和烃类化合物，因此分别选择石油醚、三氯甲烷两种溶剂为

4、提取剂。实验结果表明，用石油醚作提取剂时所得油脂量高于用三氯甲烷的，因此，实验选用石油醚为提取剂。　　2.5流动相的选择角鲨烯为不饱和烃类化合物，可选用反相色谱对其进行分离，参照陈全斌[12]方法，选用乙腈/甲醇为流动相，比例为乙腈/甲醇=60/40，选用“2.3”项确定的检测波长210nm，先后按照流速2.0，1.0ml/min，柱温20℃，30℃进样分析，发现甘草根油样品中各组分在液相条件为乙腈/甲醇=60/40，检测波长210nm，流速2.0ml/min，柱温30℃时有较好的分离效果，色谱图如图1所示。取标准溶液10μl进样，按前述同一色谱条件分析，色谱图见图2。说明在上

5、述色谱条件下标准溶液和样品待测液中角鲨烯得到充分分离，角鲨烯保留时间为15.5min左右。样品与标准液中角鲨烯保留时间一致。图1角鲨烯样品色谱图图2角鲨烯标准品色谱图　　2.8稳定性实验精密称取甘草根粉末样品20.000g，制成供试液，每隔8h进样1次，按照“2.5”项色谱条件测定峰面积并计算出角鲨烯含量。结果见表2。表2稳定性实验结果相隔时间t/h峰面积平均峰面积RSD　　2.9重复性实验精密称取甘草根粉末样品20.0000g，3份，每份制成供试液，按照“2.5”项色谱条件测定峰面积并计算出角鲨烯含量。结果见表3。表3重复性实验结果重复次数样重m/g进样量V/μl峰面积角鲨烯

6、含量　　2.10加样回收率实验采用加样回收法，精密称取已知含量的甘草样品，再分别精密添加5μl角鲨烯标准品溶液，按前述提取方法提取后用氯仿定容至10ml，进样10μl，按照“2.5”项色谱条件进行定量分析，测定峰面积并计算出角鲨烯含量，计算回收率，结果分别为：99.86%，99.94%，100.09%，平均回收率：99.96%。符合《中国药典》2005版第Ⅰ部95%～105%的规定。　　2.11样品的测定结果将上述人工栽培乌拉尔甘草和甘草种子分别按“2.2”项样品溶液的制备方法制样，在上述“2.5”项色谱条件下测定，采用外标法计算其角鲨烯含量。结果见表4。表4甘草根和甘草种子中

7、角鲨烯的含量　　3结论　　由上述分析可知，甘草中存在角鲨烯，但含量较低。在色谱条件为：].北京：人民卫生出版社，2003：222.　　[2]赵振东，孙震.生物活性角鲨烯的资源及其应用研究进展[J].林产化学与工业，2004，24(3):107.　　[3]张少民，张晓冰，于淞.角鲨烯的生物意义及其应用[J].黑龙江医学，1999，6：18.　　[4]吴时敏.角鲨烯的开发利用[J].粮食与油脂，2001，1：31.　　[5]付松，向仕学.气相色谱-质谱法检测保健食品中角鲨烯[J].中国卫生检验杂