霍乱及其诊断与治疗

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1、霍乱及其诊断与治疗——《霍乱防治手册（2013年第六版）》张健阜新市海州区疾病预防控制中心2014年4月一、病原学（一）、弧菌与霍乱弧菌生物分类：弧菌科→盐弧菌属→发光杆菌属→弧菌属→霍乱弧菌→副溶血弧菌→河弧菌→拟态弧菌→麦氏弧菌→霍利斯弧菌→溶藻弧菌→弗尼斯弧菌→创伤弧菌→海鱼弧菌→鲨鱼弧菌→辛辛那提弧菌可在人群中引起霍乱暴发、大流行：O1群霍乱弧菌→古典生物型→埃尔托生物型O139群霍乱弧菌(二)、形态与染色形态：短小稍弯曲的杆状或圆杆状菌无芽胞、无荚膜菌体两端稍平或钝圆长1.5~2.0μm、宽0.3~0.4μm菌体单端有一长达菌体4~5倍鞭毛，为其极为活泼运动提供动力O139电镜

2、下见菌体外周包绕一层较薄的荚膜染色：革兰氏染色阴性（三）、基因组霍乱弧菌有两个环状染色体→染色体Ⅰ：大部分霍乱弧菌生存所需基因位于此→染色体ⅡO1群和O139群霍乱弧菌产毒株具有霍乱毒素基因和携带毒素基因的溶原性噬菌体CTXφ基因簇不同血清群霍乱弧菌的基因组差异较大（四）、培养特性普通培养基上生长良好兼性厌氧生长温度16º~42ºC。37ºC培养适宜钠离子刺激生长，但›8%氯化钠环境中不能生长可繁殖pH为6-9.2，7.2-7.4适宜。pH8.2-8.6(有用9.2)选择性或增菌培养基可抑制其细菌生长，用于霍乱弧菌的初分离霍乱弧菌在碱性培养基中培养最初数小时生长速度可超过大肠杆菌，O1群

3、2-3小时在培养液表面形成菌膜；一般6-8小时取液体上层生长物作霍乱弧菌分离用选择性培养基可提高霍乱弧菌检出率，包括强选择性的分离培养基：硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂庆大霉素琼脂4号琼脂弱选择性分离培养基：碱性琼脂碱性胆盐琼脂（五）、生化特性糖发酵发酵、产酸不产气葡萄糖麦芽糖甘露糖蔗糖半乳糖果糖糊精可溶性淀粉迟缓发酵乳糖不发酵阿拉伯糖卫茅醇水杨素木胶糖侧金盏花醇肌醇凝集鉴定源于粪便标本可疑霍乱弧菌菌落可直接用O1群/O139群诊断血清或单抗行凝集鉴定无血清或单抗时，下列生化试验前四项有辅助筛选作用生化试验氧化酶试验：可区分肠杆菌科细菌粘丝试验：有助于区分非弧菌（如气单胞菌属细菌）克氏双

4、糖铁和三糖铁琼脂：可用于排除假单胞菌属及部分肠杆菌科细菌赖氨酸铁琼脂：有于筛选气单胞菌属和不产生赖氨酸脱羧酶的其它弧菌弧菌抑制剂O/129敏感试验：O1群90%以上敏感（大部分O139具抗性）V-P试验：大多数埃尔托型阳性；古典型少数例外均阴性；O139多阳性（六）抗原构造与血清分型O抗原：菌体表面脂多糖抗原血清群：依O抗原不同，已将霍乱弧菌鉴定出210余个血清群：O1群、O139群及其非O1群/非O139群H抗原：霍乱弧菌的鞭毛抗原所有霍乱弧菌的鞭毛抗原均相同A、B、C抗原因子：O1群霍乱弧菌菌体抗原的不同成分其中：A为群特异性、B、C为型特异性抗原O1群血清型：小川型—含A抗原因子、

5、B抗原因子及少量C因子成分稻叶型—含A因子、C因子彦岛型—含A因子、B因子、C因子；为中间型rfbT基因表达正常表现为小川型；当rfbT基因变异或其产物功能低下时表现为稻叶血清型（七）毒力因子与致病性毒力因子：霍乱毒素CT：致泻毒素中最强烈的A-B亚单位型蛋白毒素。27.2kDa的A亚单位有毒素的生物活性部分A1多肽和连接A1与B亚单位的A2多肽组成11.6kDa负责毒素与宿主细胞膜表面受体（GM1神经节苷脂）结合的B亚单位，介导CT-A亚单位进入细胞编码CT毒素的基因：霍乱弧菌中，溶原性噬菌体CTXФ基因组的一部分ctxAB基因CTXФ能以霍乱菌毛TCP为受体感染具有TCP的非产毒霍乱

6、弧菌携带ctxAB基因水平转移，使非产毒株转变为产毒株霍乱肠毒素的检测：生物学检查法免疫学测毒法分子生物学检测定居因子：重要的是TCP，属于Ⅳ型菌毛，主要亚单位为TcpA。TCP直径3-7nm、长5-10μm存在于菌体周身表面可聚成束ACP（辅助定居因子）血凝素脂多糖外膜蛋白其它菌毛其它毒素：溶血素/溶细胞素RTX外毒素志贺样毒素热稳定毒素ST钠通道抑制剂热稳定直接溶血素等等（八）、耐药性我国监测资料：O1群（埃尔托型菌株）：敏感率95%以上氨苄西林、头孢曲松、诺氟沙星、氯霉素、多西环素、阿奇霉素、呋喃妥因、庆大霉素、阿米卡星耐药率升近30%萘啶酮酸、四环素、复方新诺明O139群：存在多

7、重耐药性，›50%菌株对氯霉素、卡那霉素、萘啶酮枝、四环素、氨苄西林、复方新诺明耐药大部分对链霉素、红霉素、多粘菌素B耐药或中度耐药（九）、表型变异环境、宿主、培养条件、抗生素等多种选择性压力作用下产生形态变异：人工培养基上保存稍久成直杆状失去动力S-R变异：菌落的光滑型向粗糙型变异，用粗糙型血清做玻片凝集试验检测是否粗糙型皱褶型菌落培养传代菌株常见，不同于粗糙型粗糙型与皱褶型菌落由于分泌更多胞外多糖生物膜形成增强，对氯化水、渗透压