骨形态发生蛋白7在慢性hbv感染者肝组织中的表达

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1、骨形态发生蛋白7在慢性HBV感染者肝组织中的表达：丁芹,马会慧,崇雨田,杨绍基【摘要】【目的】通过对不同慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者肝组织中骨形态发生蛋白7（BMP-7）表达的分析，初步探讨BMP-7在肝脏炎症和肝细胞再生过程中可能发挥的作用。【方法】对56例慢性HBV感染者及5例正常对照肝组织进行常规组织学观察，按病理诊断分组。其中病毒性肝炎乙型慢性轻度12例，中度12例，重度6例，重型8例，乙肝肝硬化10例，肝癌8例。进行BMP-7的免疫组织化学染色，观察光镜下分布特点，取部分标本进行图像分析。取8例肝癌患者癌结节及3例癌旁组织进行实时荧光定量RT

2、-PCR，检测BMP-7mRNA的表达。【结果】BMP-7阳性单位在正常人肝脏（7.27±2.88）、病毒性肝炎（乙型）慢性轻度（8.50±3.22）、中度（10.96±2.88）、重度（13.11±1.26）有逐渐增加趋势，重型肝炎(7.50±1.21)、肝硬化（8.24±1.79）较中度、重度低；进一步比较BMP-7阳性区灰度有相似结果（P值均小于0.01）。BMP-7在肝脏既有胞浆型表达，也有胞膜型表达。在慢性中度、重度患者及肝硬化结节内为弥漫性表达；但在重型肝炎患者，仅呈灶状表达；在癌周组织有弥漫或灶状表达，在癌结节表达极少。【结论】在慢性乙型肝炎

3、患者肝组织中BMP-7表达增多，但是在重型肝炎肝组织及肝癌结节中表达减少，值得进一步研究。【关键词】骨形态发生蛋白7；肝炎；肝硬化；肝癌乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus，HBV）感染可导致慢性肝炎、肝硬化、肝功能衰竭及肝癌。除对症治疗外，抗病毒治疗已被越来越多的医生及患者接受。然而，无论干扰素还是核苷类似物，疗效都不令人满意，且存在不良反应，并有可能在停药后复发甚至发生肝功能衰竭[1，2]。骨形态发生蛋白（bonemorphogeicproteins，BMPs）TGF-β超家族成员中最大的一族，具有广泛生物学作用，如影响多种细胞的增殖、分化和凋

4、亡，参与组织的再生和修复。BMP-7又称骨蛋白-1（osteogenicprotein-1,OP-1），主要在骨、肾组织中表达。研究表明BMP-7具有显著的抗炎及抗纤维化作用，其作用可能与BMP-7能够拮抗TGF－β1/Smads信号通路有关[3-9]。有研究显示肝脏发育所必需的同源基因Hex活性必需BMP信号的自分泌和旁分泌[10,11]，BMP-7在肝脏器官发生发展中是一种关键的蛋白质，有利于肝细胞的健康[12]。本研究旨在通过对不同慢性HBV感染者肝组织中BMP-7表达量及表达模式的研究，发现BMP-7在在肝脏炎症损伤、肝细胞再生、肝癌细胞异常增生中

5、的表达规律，为进一步研究其作用机制及探讨其用于慢性肝病治疗的前景打下基础。1材料与方法1.1病例资料56例慢性乙型肝炎病毒感染者，男49例，女7例，标本均于中山大学附属第三医院2002至2006年门诊及住院病人，按病理诊断分组，诊断符合2000年全国病毒性肝炎会议病毒性肝炎防治方案[1]。其中病毒性肝炎乙型慢性轻度12例；中度12例；重度6例；重型8例；乙肝肝硬化10例；肝癌8例。组织标本为肝穿刺活检或肝移植手术离体后即刻取得。正常对照5例，于中山大学附属第三医院病理科保存的肝移植供肝组织。所有组织经4％多聚甲醛固定后，常规脱水，石蜡包埋，切5μm切片，5

6、8℃烤片两小时备用。取8例肝癌患者的癌组织及3例癌旁组织，TRI-reagent处理后-70℃冻存备用。1.2试剂及操作1.2.1试剂与仪器BMP-7单克隆抗体、即用型SABC免疫组化染色试剂盒、DAB显色试剂盒、PBS缓冲液、枸橼酸盐缓冲液（博士德生物工程有限公司）；TRI-reagent（Invitrogen生物科技有限公司）；一步法SYBRRT-PCR试剂盒（TaKaRa生物工程公司）。仪器设备为德国ZEISS（蔡司）Axiotron研究型显微镜、日本JVCky-F30B3-CCD彩色图像摄录输入仪、德国KONTRONIBAS2.5全自动图像分析系统

7、、ABIPRISM7000实时荧光定量PCR仪。1.2.2免疫组化步骤基本按试剂盒说明书进行。一抗BMP-7抗体用PBS1∶100稀释后使用。阴性对照以PBS代替BMP-7抗体。二抗1∶4稀释后使用。1.2.3图像分析取正常对照5例，轻度8例，中度8例，重度5例，重型7例，肝硬化7例，肝癌3例，进行全自动图像分析。每个病例分析3-4个视野取平均值。观察倍数10×20，图像面积使用单位μm2。令灰度设定0级为白，最大灰度级（Gmax）256为黑；测试区总面积为m+n，灰度为GA；阳性区面积为n，灰度为Gα；阳性反应产物在测试区的面积密度AAα＝n/（m+n）

8、。阳性单位（positiveunit,PU）按公式：PU=100×