23-plex Y-SNPs复合扩增体系在法医学应用的研究.doc

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1、23-plexY-SNPs复合扩增体系在法医学应用的研究作者：张爱平刘超李越刘长晖陈丽伟，葛璐璐，陈晓晖【摘要】【目的】应用SNaPshot技术建立23-plexY-SNPs的复合扩增体系，研究其在法医学中的应用价值。【方法】从Y染色体单体群命名树上选择23个Y-SNP位点：P164、P203、P148、P145、M89、P151、M216、P128、P157、P149、P131、P199、P123、P191、P201、M111、M9、P132、P200、P197、M119、P136和M134，进行复合PCR扩增，PCR产物纯化后利用荧光

2、标记单碱基延伸技术(SNaPshot试剂盒)结合毛细管电泳技术对单核苷酸多态性进行检测，应用该体系调查了290名广东地区无亲缘关系的男性个体。【结果】所建立的23个Y-SNPs检测体系，各位点均具有遗传多态性，基因多样性范围为0.0137～0.4912。在290名男性中检测到143个单体型，单体型多样性为0.9907。【结论】该23个Y-SNPs检测体系能快速而准确的对样本进行SNP分型，在法医学、人类学和相关学科的研究中具有较高的应用价值。【关键词】个体识别;单碱基延伸(微测序);SNaPshot试剂盒;单核苷酸多态性;Y染色体　Abs

3、tract：【Objective】Todevelopearobustsinglenucleotidepolymorphism(SNPs)typingassaywithco-amplificationandtotype23humanYchromosomeSNPsusingSNaPshotkit.【Methods】MarkersweredrawnfromthephylogenetictreeofYchromosome：P164，P203，P148，P145，M89，P151，M216，P128，P157，P149，P131，P199，P123

4、，P191，P201，M111，M9，P132，P200，P197，M119，P136，andM134.All23Y-SNPsinonereactionwereamplified;thepooledPCRproductswerepurified.Theminisequencingreactionswereperformedsimultaneouslyforall23Y-SNPswithfluorescein-labeleddideoxynucleotides.Atotalof290maleChineseinGuangdongweregen

5、otypedbycapillaryelectrophoresisandmulticolourfluorescencedetection.【Results】A23-plexY-SNPsco-amplificationsystemwasdeveloped.AlloftheY-SNPsarepolymorphicinChinese.ThegenediversityoftheY-SNPsrangedfrom0.0137-0.4912.Atotalof143haplotypeswerefound，thehaplotypediversitywasca

6、lculatedtobe0.9907.【Conclusion】The23-plexY-SNPssystemdevelopedisefficient，high-throughputandappearstobesuitableforforensicscienceandanthroponomy.8　　人类Y染色体除拟常染色区外，绝大部分为非重组区，在减数分裂中不发生重组，以单倍型的形式呈男性伴性遗传，为男性所特有。因此Y-DNA序列携带男性迁徙、进化史的信息，被广泛应用于人类的起源和进化研究。虽然Y-STR标记多态性程度较高并已广泛应用，但与常

7、染色体STR基因座一样，具有较高的突变率。Y-SNPs的突变率低，一个位点通常只有1次突变，也不易受重组的影响，因而是进化事件的忠实记录者，可以鉴定稳定的谱系关系，其所构成的单倍型组保持完整，已经被广泛应用于研究世界人群的历史、进化和迁移模式[1]，且其密度高、代表性强、遗传稳定性高、易于实现分析的自动化，因而又广泛应用于遗传疾病、药物学研究等各个方面[2]。通过对Y染色体SNPs单倍型的分析，可进行单亲案的父子亲缘鉴定，以及进行同一父系男性亲属关系的鉴定。同时Y染色体SNPs分布具有明显的地域性，可用于进行犯罪现场遗留的生物学个体所属群

8、体的推断[3]。本实验采用复合PCR扩增技术，荧光标记单碱基延伸技术结合毛细管电泳检测，同时对多个Y-SNPs位点进行快速、准确、高通量的分型检测。　　1材料与方法　　1.1主要仪器和试剂